便攜式血糖儀用于多目標(biāo)DNA和α-淀粉酶檢測的研究.pdf

1、傳統(tǒng)臨床檢驗(yàn)中許多目標(biāo)物的檢測通常轉(zhuǎn)換為對雙氧水(H2O2)或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)等少數(shù)幾種物質(zhì)的檢測，需要大型的儀器設(shè)備、復(fù)雜繁瑣的反應(yīng)步驟和較高的實(shí)驗(yàn)成本。為了發(fā)展簡便的、低成本的分析方法進(jìn)行診斷和治療，人們不斷探究新的信號(hào)轉(zhuǎn)換方式，開發(fā)低成本的便攜式儀器設(shè)備用于臨床檢驗(yàn)及家庭自我監(jiān)測。目前，有人將目標(biāo)物的檢測轉(zhuǎn)換為對葡萄糖的檢測，利用血糖儀實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)物的檢測，為傳統(tǒng)臨床檢驗(yàn)提供了一種新的手段。但是，現(xiàn)有的基于血糖儀構(gòu)建

2、的方法都只能檢測單個(gè)目標(biāo)物，且需要較長的檢測時(shí)間，因此，本文以葡萄糖為信號(hào)轉(zhuǎn)換分子，利用血糖儀發(fā)展了多目標(biāo)DNA的檢測及α-淀粉酶的快速定量檢測。具體研究工作如下:
　　1.利用便攜式血糖儀和微流控芯片發(fā)展了一種多目標(biāo)DNA同時(shí)檢測的方法。首先構(gòu)建了一個(gè)多通道微流控芯片，并在芯片不同側(cè)通道中修飾乙型肝炎病毒(HBV)不同基因分型的捕獲探針。在芯片主通道中注入樣品溶液時(shí)，樣品溶液可自動(dòng)分到四個(gè)獨(dú)立的側(cè)通道中。當(dāng)樣品溶液中存在HBVD

3、NA時(shí)，HBVDNA與側(cè)通道中的捕獲探針雜交，隨后引入洗脫液將非完全互補(bǔ)的HBVDNA洗脫下來。之后加入蔗糖酶-DNA復(fù)合物，其與捕獲探針、HBVDNA三者形成夾心式結(jié)構(gòu)，從而將蔗糖酶固定在通道表面。加入蔗糖后，蔗糖酶催化蔗糖生成葡萄糖，利用血糖儀檢測不同側(cè)通道中葡萄糖的濃度，可將不同HBV分型的濃度與葡萄糖的濃度聯(lián)系起來，從而實(shí)現(xiàn)多個(gè)目標(biāo)DNA的同時(shí)檢測。該方法簡便、靈敏，對單個(gè)目標(biāo)DNA的檢測限達(dá)到10pmol/L。此外，該方法有望

4、拓展到蛋白質(zhì)，小分子等其它目標(biāo)物的檢測。
　　2.利用便攜式血糖儀，以葡萄糖為信號(hào)轉(zhuǎn)換分子，通過一步混合反應(yīng)后，建立了一種快速檢測α-淀粉酶的新方法。該方法以麥芽戊糖為反應(yīng)底物，以α-葡萄糖苷酶作為輔助酶，當(dāng)α-淀粉酶存在時(shí)，α-淀粉酶催化麥芽戊糖水解為麥芽三糖和麥芽糖，隨后生成的麥芽三糖和麥芽糖進(jìn)一步被α-葡萄糖苷酶水解為葡萄糖。利用血糖儀檢測生成的葡萄糖，可以實(shí)現(xiàn)對α-淀粉酶的快速定量檢測。在優(yōu)化后的條件下，本方法可以在15m