獸藥多殘留懸浮芯片技術(shù)研究.pdf

1、懸浮芯片技術(shù)是最近幾十年興起的多元分析方法，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)和核酸檢測(cè)。微球是懸浮芯片技術(shù)的重要載體。本文嘗試先利用分散聚合方法合成單分散聚苯乙烯微球，再用沉降分離法分離獲得目標(biāo)微球，最后用后修飾法在微球表面修飾羧基，成功制得粒徑約為5435nm，帶羧基的單分散聚苯乙烯微球。這為以后研制懸浮芯片系統(tǒng)配套使用的熒光微球奠定扎實(shí)的基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)證明二抗上標(biāo)記的PE熒光信號(hào)能被懸浮芯片系統(tǒng)所識(shí)別，并成功地將獸藥抗原偶聯(lián)到微球上。之后優(yōu)

2、化了反應(yīng)條件，偶聯(lián)時(shí)七種獸藥抗原的最佳加入量為：甲硝唑4μg，呋喃唑酮8μg，萊克多巴胺4μg，沙丁胺醇2μg，克倫特羅4μg，磺胺二甲嘧啶4μg，磺胺喹惡啉8μg；反應(yīng)時(shí)，獸藥抗體的最佳加入量為：萊克多巴胺5ng，沙丁胺醇10ng，克倫特羅20ng，磺胺喹惡啉10ng，磺胺二甲嘧啶20ng，甲硝唑200ng，呋喃唑酮100ng；羊抗兔PE標(biāo)記二抗、羊抗鼠PE標(biāo)記二抗的最佳稀釋倍數(shù)分別為300、150；而最適的一抗孵育、二抗孵育時(shí)間分別

3、為60min、45min?；趦?yōu)化后的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，根據(jù)間接競(jìng)爭(zhēng)法，獸藥抗原偶聯(lián)微球作為探針與靶分子共同競(jìng)爭(zhēng)獸藥抗體，再以PE標(biāo)記二抗作為報(bào)告信號(hào)，建立了萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹惡啉、呋喃唑酮代謝物、甲硝唑七種獸藥的懸浮芯片技術(shù)單一檢測(cè)方法。該單一獸藥檢測(cè)方法靈敏度高，線性范圍寬，特異性強(qiáng)，回收率均在73.2％～108.3%之間。其中，萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹惡啉、呋喃唑酮代謝物、甲硝

4、唑的檢出限分別達(dá)到0.81、0.094、0.83、0.112、0.066、0.28、0.95ng/mL。
　　基于單一獸藥殘留懸浮芯片技術(shù)檢測(cè)方法和特異性識(shí)別實(shí)驗(yàn)，建立了該七種獸藥同時(shí)測(cè)定的多殘留懸浮芯片技術(shù)分析方法。該多殘留分析方法對(duì)萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹惡啉、呋喃唑酮代謝物、甲硝唑的檢測(cè)范圍分別為1.00～200、0.20～100、1.00～100、0.20～100、0.10～100、1.00～5

5、0、1.00～100ng/mL，檢出限分別為0.93、0.16、0.85、0.16、0.094、0.80、0.89ng/mL。七種獸藥的結(jié)構(gòu)類似物對(duì)檢測(cè)無(wú)明顯干擾反應(yīng)。除了 AOZ，其余獸藥的回收率均在70%～120%之間。這證明本多殘留分析方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、回收率良好等優(yōu)點(diǎn)。與酶聯(lián)免疫吸附分析法相比較，懸浮芯片技術(shù)不僅具有多元分析的特性，而且在檢測(cè)范圍、最低檢測(cè)限等許多方面也優(yōu)于ELISA。
　　綜上，懸浮