海南苦丁茶提取物對(duì)二型糖尿病小鼠降血糖作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討苦丁茶提取物對(duì)高脂飲食聯(lián)合STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠的降血糖作用，篩選出苦丁茶提取物降血糖的活性部位并用RT-PCR的方法初步探討其調(diào)節(jié)糖脂代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)情況，推測(cè)其可能的降糖機(jī)制。為苦丁茶降糖新藥的開(kāi)發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 糖尿病(DM，Diabetes Mellitus)是一種由多病因引起的內(nèi)分泌紊亂代謝性疾病，其特征表現(xiàn)為慢性高血糖。持續(xù)高血糖會(huì)帶來(lái)氧化應(yīng)激增加，久病會(huì)引起多個(gè)系統(tǒng)損傷。糖尿病屬祖國(guó)醫(yī)學(xué)

2、“消渴”范疇，至今尚無(wú)根治良方。傳統(tǒng)的磺酰脲類和雙胍類藥物久用產(chǎn)生依賴性，無(wú)效甚至出現(xiàn)毒副作用。因此尋找治療糖尿病新藥，開(kāi)發(fā)天然中草藥成分治療糖尿病，已經(jīng)為世界各國(guó)所矚目。
　　 苦丁茶冬青（Ilexkudincha C.J.Tseng）是冬青科(Aquifoliaceae)冬青屬喬木植物，是我國(guó)南方民間常用的一類植物茶，也是一種常用中藥，主產(chǎn)于湖南、湖北、廣西、廣東、海南等省?！吨兴幋筠o典》上記載苦丁茶具有散風(fēng)熱、清頭目、除煩

3、渴等功效。目前已報(bào)道的苦丁茶中含有多酚類、黃酮類、氨基酸、苦丁皂苷、維生素C、咖啡堿、蛋白質(zhì)等200多種成分。研究表明，苦丁茶具有明顯的生理活性，已經(jīng)成為治療心血管相關(guān)疾病、抗衰老、降血脂、降血糖、增強(qiáng)免疫功能等的常用輔助治療藥物[8]，但是其降糖的作用機(jī)理尚不明確，本實(shí)驗(yàn)主要研究和探討苦丁茶不同提取物的降血糖作用并初步探討其降血糖的分子機(jī)理。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:
　　 方法:
　　 1.2型糖尿病小鼠模型的建立:連續(xù)喂養(yǎng)高脂

4、飼料1個(gè)月造成小鼠高血脂模型，再腹腔注射STZ造成小鼠糖尿病模型。
　　 2.苦丁茶提取物的制備:苦丁茶水總提物凍干粉用4倍量100％甲醇回流提取2h，過(guò)濾，濾渣再回流提取2次，過(guò)濾，合并3次濾液，減壓濃縮，冷凍干燥為組分1（100％醇提組分）。濾渣再用4倍量50％的甲醇按以上同樣方法操作，得組分2（50％醇提組分）及組分3（殘?jiān)?br>　　 3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):將造模成功的糖尿病小鼠隨機(jī)分為模型組，陽(yáng)性對(duì)照組，組分1給藥組，組

5、分2給藥組及組分3給藥組共5組，并設(shè)立正常對(duì)照組，連續(xù)灌胃給藥4周。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組分別給予等量的生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給予二甲雙胍(50 mg·kg-1);3個(gè)中藥給藥組分別以相當(dāng)于生藥材15 g·kg-1的劑量給藥。給藥結(jié)束后按規(guī)定取每只小鼠的血清和內(nèi)臟作后續(xù)的生化指標(biāo)，病理以及分子生物學(xué)的檢測(cè)。
　　 結(jié)果:
　　 1.組分1能明顯改善2型糖尿病小鼠“三多一少”的狀況，使小鼠精神好轉(zhuǎn)，活動(dòng)量增大，體重回升。

6、r>　　 2.組分1、組分2均能能顯著地降低2型糖尿病小鼠的空腹血糖值，改善糖耐量，降低血清中總膽固醇以及三酰甘油的含量。其中，組分1的降糖作用最強(qiáng)。
　　 3.組分1能顯著地升高2型糖尿病小鼠血清中超氧化物歧化酶活力并能明顯地降低丙二醛的含量，提高了小鼠的抗氧化能力。
　　 4.病理學(xué)檢查顯示:經(jīng)苦丁茶提取物治療后，糖尿病小鼠肝細(xì)胞損傷減輕，炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，其中組分1治療效果最佳。
　　 5.基因相對(duì)表達(dá)量:

7、組分1、組分2能顯著地上調(diào)膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)的相對(duì)表達(dá);顯著增加低密度脂蛋白受體(LDLR)在肝臟中的相對(duì)表達(dá)量;同時(shí)組分1能明顯升高葡萄糖激酶(GCK)在肝臟中的含量;下調(diào)葡萄糖糖6-磷酸水解酶(G6PC)的相對(duì)表達(dá);而各組小鼠之間胰島素受體(IR)的表達(dá)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:苦丁茶提取物組分1能顯著地降低2型糖尿病小鼠高血糖值，改善脂代謝紊亂，提高糖尿病小鼠氧化應(yīng)激能力。確定了苦丁茶降血糖的最強(qiáng)活