藍刺頭水提物對實驗性Ⅰ型糖尿病小鼠降血糖作用及其機理研究.pdf

1、糖尿病是繼腫瘤和心血管疾病之后第三大影響人類健康的疾病，其發(fā)病人數(shù)呈逐年上升的趨勢。因此，尋找使用方便、療效確切的血糖控制藥物，對糖尿病及其并發(fā)癥的治療顯得十分重要。藍刺頭具有多種藥理活性，民間有利用藍刺頭進行糖尿病輔助治療的傳統(tǒng)，但國內(nèi)外均未見相關(guān)研究報道，本文以Ⅰ型糖尿病小鼠模型為研究對象對藍刺頭水提物(WET)的降血糖作用進行觀察，進而確定了藍刺頭水提物中降血糖的有效成分，并對其降血糖的分子機理進行了相關(guān)研究，以便為新型降血糖藥物

2、的開發(fā)提供參考依據(jù)。
　　1.在按照85mg/kg體重劑量尾靜脈注射1％的四氧嘧啶溶液成功構(gòu)建Ⅰ型糖尿病小鼠模型的基礎(chǔ)上，對WET的降血糖作用進行了觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，WET能夠顯著地降低糖尿病小鼠的空腹血糖，改善口服糖耐量，升高肝糖原和血清胰島素含量，對糖尿病小鼠的體重和胰高血糖素影響不顯著;而對健康小鼠的空腹血糖、口服糖耐量、肝糖原、血清胰島素、體重和胰高血糖素含量均不產(chǎn)生影響。確定WET對Ⅰ型糖尿病小鼠具有降血糖作用，對健康小鼠

3、血糖不產(chǎn)生影響。
　　2.為確定WET中降血糖的有效成分，首先對WET中可能含有的降血糖物質(zhì)進行了鑒定，結(jié)果顯示W(wǎng)ET中確定含有多糖類成分，并采用水提醇沉法獲得藍刺頭粗多糖(ETCP)。對比ETCP及其剩余成分(ETX)的降血糖效果后發(fā)現(xiàn)ETCP能夠顯著降低糖尿病小鼠的空腹血糖。采用木瓜蛋白酶法去除ETCP中的蛋白質(zhì)，并對其工藝參數(shù)進行優(yōu)化，在反應時間為2.6h，體系pH為6.0，反應溫度為64℃的條件下多糖保留率為98.12％，

4、蛋白清除率為56.57％。將脫蛋白后的藍刺頭多糖(ETP)使用DEAE-52柱層析進行分離純化，采用不同濃度NaCl溶液進行洗脫分級得到一種中性多糖ETPA和兩種酸性多糖ETPB、ETPC。將三種多糖分別經(jīng)Sephadex G200柱層析，采用蒸餾水進行洗脫分級，確定ETPA含有兩種不同分子量的多糖ETPA1、ETPA2，ETPB和ETPC各為分子量均一的多糖。對ETPA、ETPB、ETPC的降血糖效果進行比較后發(fā)現(xiàn)ETPB能夠顯著的降

5、低Ⅰ型糖尿病小鼠的空腹血糖，確定WET中降血糖的主要成分為ETPB。
　　3.對灌胃ETPB后Ⅰ型糖尿病小鼠的空腹血糖、體重、口服糖耐量、肝糖原、血清胰島素和胰高血糖素含量進行了測定，并利用實時熒光定量PCR的方法對小鼠胰腺中PDX-1、IRS-2、Fas、caspase-3、GK、GLUT2及肝臟中GK、G-6-P基因的相對表達量進行了研究，分析ETPB對Ⅰ型糖尿病小鼠降血糖作用的分子機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ETPB能夠降低糖尿病小鼠的空

6、腹血糖，增加體重，改善口服糖耐量，增加肝糖原和血清胰島素含量，對胰高血糖素無影響。實時熒光定量PCR對各基因的測定結(jié)果顯示，ETPB能夠上調(diào)胰腺中PDX-1、IRS-2、Fas、 caspase-3、GK、GLUT2基因及肝臟中GK基因的表達，對肝臟中G-6-P基因表達無影響。綜合分析ETPB降血糖的分子機理為ETPB通過上調(diào)胰腺PDX-1和IRS-2基因的表達，增加胰島β細胞的再生，下調(diào)胰腺中凋亡相關(guān)因子Fas，caspase-3基因

7、的表達抑制胰島β細胞的凋亡，促進胰島β細胞中GK、GLUT2基因的表達增加血清胰島素的含量，同時促進肝臟中GK基因的表達提高肝臟糖代謝能力，相關(guān)實驗研究也證明了這一結(jié)論。
　　全文研究表明，WET具有較好的降血糖作用，其中ETPB為其降血糖作用的主要成分，其可能機制包括促進胰島β細胞的再生、抑制胰島β細胞的凋亡、促進胰島素的分泌、提高肝臟糖代謝能力。但ETPB的結(jié)構(gòu)有待進一步的明確，同時其降血糖作用機理需進行更深入的研究，為藍刺頭