兩種新型β-受體激動(dòng)劑溴布特羅和西布特羅酶免疫分析法的建立.pdf

1、β-受體激動(dòng)劑也就是人們常說(shuō)的瘦肉精，這類(lèi)物質(zhì)具有營(yíng)養(yǎng)再分配的作用，能有效提高動(dòng)物體的瘦肉率，常被用于畜牧業(yè)生產(chǎn)，并通過(guò)食物鏈危害人們的身體健康。在畜產(chǎn)品中殘留而引發(fā)的食物中毒事件見(jiàn)諸報(bào)端，中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部已多次頒布公告，明確提出禁止在動(dòng)物飼料及其飲用水中添加β-激動(dòng)劑。目前，最常使用的β-激動(dòng)劑主要有鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇，近幾年也出現(xiàn)了一種新的β-激動(dòng)劑苯乙醇胺A，這幾種瘦肉精都已具備了相應(yīng)的檢測(cè)方法。然而，作為新型

2、瘦肉精的溴布特羅和西布特羅，其結(jié)構(gòu)與克倫特羅相似，但測(cè)定方法有限。為對(duì)今后可能存在的瘦肉精類(lèi)食品安全問(wèn)題加以防范，建立溴布特羅和西布特羅的快速測(cè)定方法很有必要。
　　本研究考慮到溴布特羅和西布特羅的結(jié)構(gòu)十分相近，苯環(huán)上都帶有氨基，因而均采用重氮化法合成溴布特羅與西布特羅的包被抗原及免疫原，最終得到溴布特羅和西布特羅兩種多克隆抗體，分別建立了靈敏度高、特異性強(qiáng)的酶聯(lián)免疫吸附分析（ic-ELISAs）法，同時(shí)通過(guò)高效液相色譜(HPLC

3、)法印證了該法測(cè)定實(shí)際樣品的可行性。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，基于溴布特羅抗體的ELISAs法的IC50值在0.165-0.243 ng·mL-1之間，基于西布特羅抗體的ELISAs法的IC50值為0.218 ng·mL-1，表明本研究所建立的酶聯(lián)免疫吸附分析法靈敏度高。同時(shí)該方法的交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)表明了其較高的特異性。本研究選擇豬肉、豬肝和豬飼料這三種實(shí)際樣品進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定，考察方法的準(zhǔn)確性和精密度，其中，測(cè)定溴布特羅的回收率為91.9–115

4、.4％，批內(nèi)變異系數(shù)（CV）為1.5–9.5%(n=3)，批間CV為1.7–13.4%(n=3)；測(cè)定西布特羅的回收率在95.41–114.5%，批內(nèi)CV為2.2–9.3%(n=3)，批間CV為2.3–12.3%(n=3)。與HPLC的測(cè)定結(jié)果相比，基于溴布特羅和西布特羅的兩種ELISA方法均與HPLC有著很好的相關(guān)性。此外，針對(duì)西布特羅酶免疫分析方法，本研究還選取了基于金納米顆粒的免疫層析試劑條作為方法對(duì)照，半定量試劑條的最低檢測(cè)限在