補腎健骨中藥對女性運動員骨組織保健的機理研究.pdf

1、目的：通過體外分別培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細胞、成骨細胞與共同培養(yǎng)這兩種細胞，測定與分析杜仲葉提取物對大鼠顆粒細胞產生雌激素的影響，進一步觀察與分析顆粒細胞所產生的雌激素對成骨細胞分泌堿性磷酸酶(ALP)的影響，從細胞與分子水平探討補腎健骨中藥杜仲葉提取物對Ⅰ型骨質疏松癥的防治機理，為保護女性運動員骨組織健康提供營養(yǎng)保健依據。 方法：細胞水平研究——加入不同濃度的杜仲葉提取物于培養(yǎng)基中，進行大鼠卵巢顆粒細胞體外培養(yǎng)，作用48小時后，采用

2、MTT法測定細胞增殖率，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immLmosorbent assay，ELISA)測定各培養(yǎng)液中雌二醇(E<,2>)的生成量。采用膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)大鼠成骨細胞，取第三代成骨細胞進行培養(yǎng)，以顆粒細胞和成骨細胞數目比(2∶1，1∶2)直接混合培養(yǎng)，加入最適濃度的杜仲葉提取物，培養(yǎng)72小時，測定培養(yǎng)液中生成堿性磷酸酶(ALP)的量。分子水平研究——采用RT-PCR技術，分析測定杜仲葉提取物對

3、成骨細胞表達護骨因子OPG量的影響。 結果：用不同濃度的杜仲葉提取物分別作用于顆粒細胞48小時，杜仲葉提取物可增加顆粒細胞的增殖和雌二醇的生成量，隨著濃度的降低，促進作用逐漸減弱，呈劑量依賴性關系。在10<'-5>g/ml時與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。在成骨細胞和顆粒細胞的共同培養(yǎng)72小時后，顆粒細胞和成骨細胞數目比為1∶2組效果明顯，其中共同培養(yǎng)產生的堿性磷酸酶的濃度與相同數目單獨培養(yǎng)的成骨細胞中直接加杜仲葉提取

4、物產生的堿性磷酸酶濃度相比較，有顯著性差異(P<0.05)。杜仲葉提取物可提高成骨細胞護骨因子OPG表達量。 結論：杜仲葉提取物呈劑量依賴性地增加大鼠顆粒細胞雌二醇的生成量，同時在顆粒細胞和成骨細胞混合培養(yǎng)中，顆粒細胞產生的雌二醇又可以增加成骨細胞堿性磷酸酶的分泌，表明杜仲葉提取物除直接促進成骨細胞的生成外，還可通過對性腺的作用來增加體內雌激素的分泌促進成骨細胞的生成。因此杜仲葉提取物防治骨質疏松癥是多靶點的；在分子水平上，通過