競技運動員骨健康保護與杜仲葉防治OP分子機理研究.pdf

1、目的：為競技運動員提供安全有效的護骨類功能食品與研制高效防治運動性骨質(zhì)疏松癥的杜仲類中成藥提供理論基礎(chǔ)。從細(xì)胞水平與分子水平研究杜仲葉提取物對大鼠成骨細(xì)胞生長的影響和對腎細(xì)胞分泌護骨素(OPG)的影響，探討藥食兩用的杜仲葉多靶位防治骨質(zhì)疏松癥的分子機理。 方法：①分析比較競技運動員骨組織健康狀況與運動性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生；②杜仲葉提取物——從新鮮杜仲葉獲得提取液，制各杜仲葉浸膏；③細(xì)胞培養(yǎng)——在體外培養(yǎng)的大鼠成骨細(xì)胞和腎細(xì)胞中加入

2、不同濃度的杜仲提取物作用96h，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法對腎細(xì)胞分泌的OPG和成骨細(xì)胞分泌的破骨細(xì)胞分化因子(RANKL)、骨鈣素(OC)、Ⅰ型膠原(COLL-Ⅰ)的濃度進行測定；對體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞和腎細(xì)胞進行1∶1和1∶2的混合培養(yǎng)，加入不同濃度的杜仲提取物，采用MTT法測定細(xì)胞的增殖情況。④分子水平研究——分別對加入最佳濃度杜仲葉提取物作用的成骨細(xì)胞和腎細(xì)胞OPG mRNA進行RT-PCR，檢測mRNA的轉(zhuǎn)錄量。

3、 結(jié)果：體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞在不同濃度杜仲葉提取物的作用下，分泌RANKL、OC、COLL-Ⅰ都有區(qū)別，和空白組進行對照有顯著性差異。利用RT-PCR檢測OPG的mRNA轉(zhuǎn)錄量，加藥組比空白組的轉(zhuǎn)錄量更高；體外培養(yǎng)腎細(xì)胞在杜仲葉提取物不同濃度的作用下，OPG的分泌量不同，和空白組相比有顯著性差異。混合培養(yǎng)的最佳比例是成骨細(xì)胞∶腎細(xì)胞為2∶1，這樣更能促進成骨細(xì)胞的生長。MTT 的檢測說明不同濃度杜仲葉提取物對細(xì)胞生長的作用不同，在10<'-

4、4>g/ml、10<'-5>g/ml、10<'-6>g/ml這三個濃度中，表現(xiàn)出作用效果的劑量依賴性。對成骨細(xì)胞作用最明顯的劑量是10<'-5>g/ml。對腎細(xì)胞作用最明顯的劑量是10<'-4>g/ml，而10<'-3>g/ml反而會抑制細(xì)胞的生長。 結(jié)論：杜仲葉提取物對成骨細(xì)胞和腎細(xì)胞具有明顯的作用，可協(xié)同調(diào)節(jié)骨代謝過程。是一種多靶點發(fā)揮成骨作用的藥食兩用的道地中藥材。它降低破骨細(xì)胞的活性，增加骨密度，促進骨重建，有效防治骨質(zhì)