杜仲葉總提物雙向調(diào)節(jié)骨代謝平衡機(jī)理研究.pdf

1、目的： 研究杜仲葉總提物對(duì)體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞的影響及對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的影響，從抑制破骨細(xì)胞骨吸收和促進(jìn)成骨細(xì)胞骨形成兩個(gè)角度探討杜仲葉總提物防治骨質(zhì)疏松癥的雙向作用機(jī)理。 方法： 1．取新生24 h內(nèi)的SD大鼠股骨、脛骨及肱骨分離已分化成熟的破骨細(xì)胞。 2．分別以高、中、低濃度的杜仲葉總提物對(duì)成熟的破骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色計(jì)數(shù)破骨細(xì)胞數(shù)目，甲苯胺藍(lán)染色計(jì)數(shù)

2、象牙片上吸收陷窩的數(shù)目。 3．取30 d的SD大鼠股骨及脛骨的骨髓，用全骨髓法貼壁分離篩選骨髓基質(zhì)細(xì)胞。 4．分別以高、中、低濃度的杜仲葉總提物對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行持續(xù)培養(yǎng)，以不含杜仲葉總提物的DMEM培養(yǎng)液為空白對(duì)照，采用Gomori鈣鈷法、茜素紅法染色分別觀察各組堿性磷酸酶（ALP）、鈣結(jié)節(jié)情況，并取各組不同時(shí)間點(diǎn)的培養(yǎng)液測(cè)定敏感性成骨指標(biāo)堿性磷酸酶活性。 結(jié)果： 1．高、中、低濃度杜仲葉總提物均減少T

3、RAP染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目，也減少骨片吸收陷窩的數(shù)目，與空白對(duì)照組比較有顯著性的差異，且高濃度杜仲葉總提物的影響最顯著。 2．高、中、低濃度杜仲葉總提物培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細(xì)胞，堿性磷酸酶染色均呈陽(yáng)性，持續(xù)培養(yǎng)能形成鈣結(jié)節(jié)；高、中、低濃度杜仲葉總提物同空白對(duì)照組比較有顯著性的差異，且高濃度杜仲葉總提物的影響最顯著。 3．堿性磷酸酶活性測(cè)定結(jié)果為：隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，高、中、低濃度杜仲葉總提物與空白對(duì)照組的堿性磷酸酶活性均增加，3d

4、時(shí)各濃度組與空白對(duì)照組間無(wú)明顯的差異，但是6d時(shí)各濃度組的堿性磷酸酶活性均明顯高于空白對(duì)照組。 結(jié)論： 1．在一定濃度范圍內(nèi)，杜仲葉總提物對(duì)破骨細(xì)胞性骨吸收有明顯地抑制作用。 2．采用全骨髓法可獲得生長(zhǎng)性狀穩(wěn)定，增殖速度快，貼壁細(xì)胞成活率高的大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞。原代培養(yǎng)過(guò)程中，接種后48h首次半量換液，可更大限度的獲得骨髓基質(zhì)細(xì)胞。 3．在一定濃度范圍內(nèi)，杜仲葉總提物能促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。