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文檔簡介
1、目的：通過觀察慢性高原病患者骨髓有核紅細(xì)胞中Ras、Raf、MEK、ERK水平的變化，探討ERK信號(hào)通路在CMS發(fā)生、發(fā)展中的作用。并進(jìn)一步通過應(yīng)用ERK信號(hào)通路抑制劑PD98059，探討PD98059在該信號(hào)通路中的作用，進(jìn)一步驗(yàn)證 ERK信號(hào)通路對CMS發(fā)病機(jī)制的影響。
方法：選擇青海大學(xué)附屬醫(yī)院收治的男性CMS患者及單純陳舊性骨折患者各16例，采集骨髓液提取單個(gè)核細(xì)胞，用CD71與CD235a抗體篩選陽性細(xì)胞。其中CMS
2、組骨髓有核紅細(xì)胞分為5組：空白對照組、DMSO溶劑對照組、PD980595?mol/L、PD9805910?mol/L、PD9805920mol/L。于37℃、5％CO2、3％ O2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h，用Elisa法測定上清液中 Ras-GTP的水平，用RT-PCR法測BRaf、MEK、ERK1/2 mRNA的表達(dá)，用Western Blot方法檢測p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)。
結(jié)果：⑴CMS組骨髓
3、有核紅細(xì)胞中 Ras-GTP水平[(21.34?0.78) pg/mL]高于對照組[(19.38?0.88) pg/mL],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CMS組BRaf、MEK、ERK1/2 mRNA的水平（1.60?0.38、2.571.50、1.11?0.59、1.08?0.79）均高于對照組（0.81?0.44、0.95?0.41、0.520.55、0.38?0.28），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。⑵PD98059對
4、Ras-GTP的影響：各組間Ras-GTP的水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.798）。⑶PD98059對BRaf、MEK、ERK1/2mRNA的影響：與溶劑對照組相比，BRaf、MEKmRNA的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值為0.826、0.298）。與PD9805920?mol/L比較，ERK1/2mRNA的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值為0.001、0.002）。⑷PD98059對 p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白的影響
5、：與溶劑對照組相比，p-BRaf、p-MEK蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值為0.370、0.351）。與PD9805920mol/L比較，p-ERK1/2蛋白水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值為<0.001、0.007）。
結(jié)論：①Ras/Raf/MEK/ERK通路的異常激活可能參與了 CMS紅細(xì)胞過度積累的發(fā)生、發(fā)展過程，推測其可能是 CMS發(fā)生機(jī)制中的信號(hào)傳導(dǎo)通路之一。②PD98059能夠下調(diào)ERK1/2 mRNA及p-ERK1
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