苗藥HL-1112對幽門螺桿菌的抗菌活性及藥物作用前后蛋白質(zhì)組學(xué)影響的研究.pdf

1、目的：檢測苗藥 HL-1112對幽門螺桿菌的體外抗菌活性，觀察苗藥HL-1112作用幽門螺桿菌前后的蛋白質(zhì)及基因表達水平的變化，初步探討苗藥HL--1112對幽門螺桿菌的抑菌機制，為深入研究苗藥 HL-1112的作用機制和開發(fā)利用苗藥 HL-1112提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：采用瓊脂稀釋法檢測苗藥HL-1112對幽門螺桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)測序株ATCC700392的最低抑菌濃度（Minimal inhibitory concentrati

2、on，MIC）；選用三氯醋酸/丙酮沉淀法收集藥物作用前后的幽門螺桿菌全菌蛋白，應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)(2-DE)對其進行分離，PDquest軟件尋找藥物作用前后表達差異明顯的蛋白質(zhì)點，ABI-4800質(zhì)譜儀對差異蛋白點進行質(zhì)譜鑒定，生物信息學(xué)分析差異蛋白的性質(zhì)與功能；采用 Real-time PCR技術(shù)檢測2-DE中的差異蛋白-過氧化氫酶在藥物作用前后的基因表達水平。
　　結(jié)果：苗藥 HL-1112對幽門螺桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)測序株 ATC

3、C700392的MIC為4mg/mL，且其對細(xì)菌的抑制作用與藥物濃度成正比；通過質(zhì)譜技術(shù)鑒定出14個差異蛋白點，其中延胡索酸還原酶黃素蛋白亞基、烷基過氧化氫還原酶、假想蛋白0130、粘附-巰基還原酶、非血紅素鐵蛋白僅在藥物作用前的全菌蛋白中表達，乙酰脲利用蛋白A、亮氨酰胺肽酶、過氧化氫酶、cag致病島、延胡索酸還原酶鐵硫亞基和假想蛋白0721在苗藥 HL-1112作用后明顯下調(diào)，而丙酰胺左旋門冬氨酸酶、延長因子 P和NADPH黃素還原酶

4、的蛋白表達則在藥物作用后上調(diào)；Real-time PCR結(jié)果顯示幽門螺桿菌過氧化氫酶在藥物作用后的基因表達水平高于藥物作用前的表達水平。
　　結(jié)論：
　　1.苗藥 HL-1112對幽門螺桿菌具有良好的抑菌效果，其MIC為4mg/mL,且抗菌活性與藥物濃度成正比；
　　2.苗藥 HL-1112通過干擾Hp的抗氧化系統(tǒng)，抑制Hp的毒力因素及影響Hp的能量代謝與生物合成等發(fā)揮其抑菌機制；
　　3.苗藥 HL-1112影