脂氧素對滋養(yǎng)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、【目的】
　　 主要研究脂氧素(lipoxinA4，LXA4)對脂多糖(LPS)刺激的滋養(yǎng)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制。
　　 【方法】
　　 細(xì)胞實驗分為4組：(1)對照組，(2)LPS組：10μg/mlLPS作用24h(3)LPS+100nmol/LLXA4組：10μg/mlLPS+100nmol/LLXA4作用24h(4)LPS+200nmol/LLXA4組：10μg/mlLPS+200nmol/LLX

2、A4作用24h。以2，7二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)水平；細(xì)胞免疫熒光檢測轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)轉(zhuǎn)位變化；Western-blot檢測滋養(yǎng)細(xì)胞胞核、胞質(zhì)中Nrf2蛋白的表達(dá)；RT-PCR檢測Nrf2下游抗氧化酶mRNA的表達(dá)；黃嘌呤氧化酶法檢測細(xì)胞上清SOD的含量；酶偶聯(lián)法檢測谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX，GPX)的活力。<

3、br>　　 【結(jié)果】
　　 1.ROS的檢測：LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)DCF密度值為(77.00±5.83)，與對照組(53.00±3.08)相比，LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯升高（P＜0.01），使用100nmol/L、200nmol/LLXA4干預(yù)后，細(xì)胞內(nèi)ROS水平均明顯下降，DCF密度值分別下降至(62.00±3.39、55.00±4.30，P＜0.01)；
　　 2．細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示：LPS組Nrf2主要在

4、胞質(zhì)中表達(dá)。而加入LXA4干預(yù)后胞核可見較強(qiáng)的Nrf2的表達(dá)；其中加入200nmol/LLXA4作用后胞核中的Nrf2的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01)。
　　 3．Western-blot結(jié)果顯示：與對照組相比，LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞胞核中Nrf2蛋白水平明顯下降(P＜0.01)，胞質(zhì)中Nrf2蛋白水平明顯上調(diào)（P＜0.01），使用100nmol/L、200nmol/LLXA4干預(yù)后滋養(yǎng)細(xì)胞胞核中的Nrf2蛋白水平均上升(P＜0.05、

5、P＜0.01)，胞質(zhì)中Nrf2蛋白水平均明顯下降(P＜0.01)。
　　 4．RT-PCR結(jié)果顯示：LPS組HO-1、SOD、GPXmRNA表達(dá)水平明顯低于對照組（P＜0.01），使用100nmol/LLXA4干預(yù)后HO-1、SOD、GPXmRNA表達(dá)水平均高于LPS組(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)，而LPS+100nmol/LLXA4組與LPS+200nmol/LLXA4組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

6、
　　 5．黃嘌呤氧化酶法結(jié)果顯示：LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞上清液中的SOD含量為(4.77±0.34)U/ml，與對照組(9.21±0.74)U/ml相比明顯下降（P＜0.01），給予100nmol/L、200nmol/LLXA4干預(yù)后，均能明顯增加SOD含量，酶活力分別上升至(8.93±0.53、16.74±0.64)U/ml(P＜0.01)。
　　 6．酶偶聯(lián)法結(jié)果顯示：LPS組滋養(yǎng)細(xì)胞裂解液中GPX含量為(8.65±0.