Nrf2參與脂氧素對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:腦缺血再灌注雖然可以挽救瀕臨死亡的神經(jīng)細(xì)胞,但與此同時(shí)又可加重對(duì)缺血細(xì)胞的損傷,導(dǎo)致嚴(yán)重的遲發(fā)型神經(jīng)元損傷,影響患者的預(yù)后和功能恢復(fù),即再灌注損傷。它是由多種原因引起的復(fù)雜的病理生理過(guò)程,大量研究表明,在缺血再灌注時(shí)會(huì)伴隨大量活性氧自由基(ROS)的產(chǎn)生,通過(guò)氧化反應(yīng)與腦組織中的脂質(zhì)、DNA和蛋白發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致細(xì)胞壞死和凋亡,是造成腦損傷的重要機(jī)制。紅細(xì)胞系-2 p45(NF-E2)相關(guān)因子-2(nuclear factor

2、erythroid-2 related factor2,Nrf2)是一種可以調(diào)節(jié)許多抗氧化基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子,其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可通過(guò)一系列的酶促反應(yīng)降低ROS的含量。因此,增強(qiáng)腦缺血再灌注后Nrf2的表達(dá)進(jìn)而降低ROS的含量勢(shì)必會(huì)對(duì)改善腦缺血疾病的預(yù)后有著重要的意義。脂氧素(Lipoxins,LXs)是體內(nèi)一種重要的脂質(zhì)抗炎物質(zhì),被稱為炎癥反應(yīng)的“剎車(chē)信號(hào)”。我們認(rèn)為脂氧素很可能通過(guò)上調(diào)Nrf2的表達(dá)對(duì)腦缺血再灌注引起的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)起到

3、保護(hù)作用。
　　目的:探討脂氧素對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其對(duì)Nrf2和P62的調(diào)控作用。
　　方法:采用線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)再灌注模型,實(shí)驗(yàn)分為三組:假手術(shù)組(sham),模型組(I/R),脂氧素組(LXA4),用2,3,5三苯基氯化(TTC)染色觀察梗死灶面積,用Western Blot法檢測(cè)組織中總Nrf2蛋白,核內(nèi)Nrf2蛋白

4、以及總P62蛋白的表達(dá)。提取大鼠大腦皮層原代的星形膠質(zhì)細(xì)胞,分為三組:空白對(duì)照組,缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)組,OGD+脂氧素組,用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總Nrf2蛋白以及細(xì)胞核Nrf2蛋白的表達(dá),用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)P62基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)與模型組相比,脂氧素組梗死灶面積明顯減小。
　　(2)在動(dòng)物組織中,與模型組相比,脂氧素組Nrf2,P62表

5、達(dá)上調(diào)。
　　(3)在動(dòng)物組織中,與模型組相比,脂氧素組核內(nèi)Nrf2表達(dá)上調(diào)。
　　(4)在星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi),與OGD組相比,OGD+脂氧素組Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　(5)在星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi),與OGD組相比,OGD+脂氧素組細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　(6)在星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi),與OGD組相比,OGD+脂氧素組P62基因表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:脂氧素對(duì)腦缺血具有保護(hù)作用,通過(guò)上調(diào)Nrf2和P62的表達(dá)來(lái)減