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文檔簡介
1、本研究通過構(gòu)建雞骨骼肌細胞氧化應(yīng)激模型,探討脂聯(lián)素在p53、溶酶體、線粒體等的參與下,對肉雞骨骼肌細胞氧化損傷的修復(fù)機制,為肉雞抗應(yīng)激高效養(yǎng)殖提供依據(jù)。試驗結(jié)果如下:
1分離培養(yǎng)肉雞骨骼肌衛(wèi)星細胞并鑒定,過氧化氫處理構(gòu)建肉雞骨骼肌氧化應(yīng)激模型,分析氧化應(yīng)激和細胞活力相關(guān)指標。結(jié)果表明:(1)DESMIN免疫熒光鑒定培養(yǎng)獲得的細胞為骨骼肌衛(wèi)星細胞;(2)H2O2處理獲得的衛(wèi)星細胞,ROS、MDA含量水平和TUNEL染色細胞凋亡率
2、顯著升高,細胞活力、SOD和GSH-Px酶活力單位顯著降低(P<0.05),表明過氧化氫處理構(gòu)建的骨骼肌衛(wèi)星細胞氧化應(yīng)激模型成功。
2脂聯(lián)素處理肉雞骨骼肌氧化應(yīng)激模型衛(wèi)星細胞,分析細胞內(nèi)溶酶體和線粒體指標的變化。結(jié)果表明:(1)脂聯(lián)素處理組細胞ROS、MDA含量水平和凋亡率顯著降低,細胞活力、SOD和GSH-Px酶活力單位顯著升高(P<0.05);(2)脂聯(lián)素處理組顯著改善溶酶體和線粒體的膜通透性,Bax、Cyt-c、Casp
3、ase8、Cathepsin B、Chymosin基因和蛋白水平均顯著降低,Bcl-2基因和蛋白水平顯著升高(P<0.05)。表明脂聯(lián)素通過改善細胞溶酶體和線粒體功能來修復(fù)骨骼肌細胞的氧化損傷。
3p53抑制劑PFT-α與脂聯(lián)素共同處理氧化應(yīng)激模型細胞,研究p53參與脂聯(lián)素修復(fù)氧化應(yīng)激的機制。結(jié)果表明:與脂聯(lián)素處理氧化應(yīng)激模型組相比,(1)PFT-α進一步顯著降低了細胞ROS、MDA含量水平和TUNEL凋亡率,促進細胞活力、S
4、OD和GSH-Px酶活力提高(P<0.05);(2)PFT-α改善溶酶體和線粒體的膜通透性,抑制Bax、Cyt-c、Caspase8、Cathepsin B、Chymosin基因和蛋白表達水平,促進Bcl-2基因和蛋白表達(P<0.05)。抑制p53表達,可進一步促進脂聯(lián)素修復(fù)骨骼肌細胞氧化損傷的作用。
綜上所述,脂聯(lián)素可通過抑制p53的表達,改善細胞溶酶體和線粒體膜通透性、恢復(fù)膜電位、抑制凋亡基因和蛋白的表達、以及細胞凋亡進
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