農(nóng)藥氟蟲(chóng)腈作用下斑馬魚(yú)miR-155對(duì)UHRF1的調(diào)控作用.pdf

1、農(nóng)藥氟蟲(chóng)腈對(duì)生物體具慢性神經(jīng)毒性，對(duì)生態(tài)環(huán)境具潛在的危險(xiǎn)性。研究表明，miRNA在農(nóng)藥等化學(xué)物質(zhì)作用下，其表達(dá)發(fā)生改變，進(jìn)一步與靶基因堿基互補(bǔ)配對(duì)，調(diào)控基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)室前期的研究表明，用三唑磷微乳劑、氟蟲(chóng)腈微乳劑及其混合物分別處理斑馬魚(yú)后，包括miR-155、miR-99在內(nèi)的21條miRNA的表達(dá)發(fā)生改變。miR-155是一個(gè)典型的多功能miRNA，miR-155參與血細(xì)胞生成、炎癥和免疫等多種生物學(xué)過(guò)程。因而通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析不同濃度氟蟲(chóng)

2、腈等農(nóng)藥處理后，miRNA和相關(guān)靶基因在核酸和蛋白水平的表達(dá)，有助于明確miR-155和相關(guān)靶基因在外源化學(xué)物質(zhì)毒理學(xué)效應(yīng)中的作用與關(guān)系。
　　 本論文以dre-miR-155為研究對(duì)象，通過(guò)生物信息學(xué)分析，對(duì)其靶標(biāo)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)合互補(bǔ)“種子”序列、結(jié)合的自由能以及各數(shù)據(jù)庫(kù)中的排位等因素，選取miR-155潛在靶基因UHRF1為研究對(duì)象。UHRF1基因表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞B-549的生長(zhǎng)，且UHRFl蛋白在甲基化的調(diào)控過(guò)程、癌癥的

3、表觀遺傳學(xué)機(jī)制等生物學(xué)過(guò)程中具有重要作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)將斑馬魚(yú)分成8組，一組為空白對(duì)照，一組為溶劑（萬(wàn)分之一DMSO）對(duì)照，其余6組斑馬魚(yú)分別用不同濃度氟蟲(chóng)腈處理。采用熒光定量PCR技術(shù)研究miR-155及其潛在靶基因UHRF1在氟蟲(chóng)腈處理前后的表達(dá)變化情況，結(jié)果表明，miR-155表達(dá)上調(diào)，則UHRF1表達(dá)下調(diào)，反之則上調(diào)。通過(guò)蛋白含量測(cè)定、Western blot及相關(guān)數(shù)據(jù)分析UHRF1蛋白處理前后表達(dá)情況，結(jié)果表明UHR

4、F1蛋白表達(dá)量隨miR-155表達(dá)的增加而減少。因此，miR-155可能對(duì)UHRF1蛋白的表達(dá)有負(fù)向調(diào)控作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析miR-155和UHRF1的轉(zhuǎn)錄水平與UHRF1在蛋白水平的表達(dá)的相關(guān)性，從核酸量、基因和蛋白水平研究miR-155對(duì)基因UHRF1的調(diào)控作用，對(duì)miR-155潛在靶基因UHRF1進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。這將豐富miRNA作為生物標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)對(duì)環(huán)境影響的研究，同時(shí)為miRNA調(diào)控基因的表達(dá)以及在動(dòng)物中