顯微捕獲聯(lián)合低體積擴增細胞標識與法醫(yī)應用的研究.pdf

1、目的:
　　 顯微捕獲聯(lián)合低體積擴增(Low volume polymerase chain reaction,LVPCR)技術進行細胞分離檢驗為法醫(yī)混合微量生物檢材的檢驗提供了有效途徑,但法醫(yī)實踐檢案的檢材細胞質量良莠不齊,又含雜質干擾等,致使鏡下目的細胞的辨識成為檢驗結果好壞的關鍵環(huán)節(jié)之一。本研究基于顯微捕獲儀平臺,應用組織學染色的原理,初步建立一種適用于顯微捕獲聯(lián)合LVPCR的細胞標識方法,并評價在法醫(yī)實際應用的效果。

2、r>　　 方法:
　　 取10名志愿者的口腔拭子及2個案例檢材為樣本,制作細胞懸液;配制0.05g/ml龍膽紫及2.5×104 g/ml亞甲基藍染液。通過濃度梯度及時間梯度染色,分別建立并優(yōu)化以龍膽紫、蘇木素、亞甲基藍為標識物的細胞懸液單染法;基于顯微捕獲儀平臺,分別對等量染色的口腔上皮細胞進行分離檢驗,比較3種染色法及染色時間對顯微捕獲聯(lián)合LVPCR技術檢測結果的影響,優(yōu)化細胞標識物;應用3者中較優(yōu)的染色法對志愿者口腔上皮細

3、胞懸液染色,捕獲不同樣本等量染色及未染色細胞分離檢驗,并對同一樣本重復該操作20次,比較2種條件下檢測結果成功分型率的差異,評價該染色法在顯微捕獲聯(lián)合LVPCR技術中的適用性;應用于案例檢材的細胞分離檢驗,初步研究所建細胞標識法的應用效果。
　　 結果:
　　 室溫條件下,100μl細胞懸液加入0.5μl0.05g/ml龍膽紫染液,染色5min,胞核呈紫紅色,與胞漿對比明顯,染色效果不隨染色時間(≤60min)延長而明顯

4、變化。優(yōu)化后的3種細胞懸液單染法均能對口腔上皮細胞胞核清晰標識,但龍膽紫染色細胞的分離檢驗的成功分型率及有效分型率均高于另外兩種染色法,且染色時間(≤60min)對DNA檢測結果無明顯影響;而與未染色等量細胞分離檢驗結果比較,不同樣本及同一樣本多次重復試驗結果的成功分型率無明顯差異(p＞0.05)。案例檢材應用,目的細胞標識清楚,較未染色時易于辨識,捕獲到更多目的細胞,多次分離檢驗結果疊加復合達同一認定標準。
　　 結論: