深海嗜壓菌SS9中水通道蛋白基因的異源表達及生物學(xué)功能評價.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、水通道蛋白(AQP)對水具有極高的滲透性,有可能在仿生廢水回收以及海水淡化等領(lǐng)域具有潛在的重要應(yīng)用價值。本論文的研究目標是對來源于深海嗜壓菌Photobacterium profundum SS9的潛在水通道蛋白基因(aqpSS9)進行在多種異源表達體系中進行表達,并分析其可能的生物學(xué)功能。
   首先利用生物信息學(xué)分析表明,AqpSS9肽鏈一級結(jié)構(gòu)與大腸桿菌AqpZ的同源性高達67%,內(nèi)含水通道蛋白的2個NPA保守序列,具有6

2、個跨膜結(jié)構(gòu),從而具有強烈疏水特性,預(yù)測將整合在細胞膜上,有可能是一種新型的水通道蛋白。
   采用PCR方法從P.profundum SS9細菌基因組擴增得到AqpSS9的編碼基因,構(gòu)建成功表達載體pUC19-AqpSS9和pSJ2-AqpSS9,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,形成大腸桿菌MM/pUC19-AqpSS9和MM/pSJ2-AqpSS9。然后將這二種基因工程菌與AqpZ-改造菌MM1211(aqpZ-)在低滲條件下分別進行混合培養(yǎng),

3、以觀察重組菌與改造菌的生長競爭現(xiàn)象。實驗發(fā)現(xiàn)重組菌對改造菌有極明顯的生長競爭優(yōu)勢,兩者菌量比值最高可達32倍,從而間接鑒定了AqpSS9具有一定的水透過功能。
   進一步對AqpSS9在大腸桿菌中的表達條件進行優(yōu)化。在優(yōu)化了誘導(dǎo)條件(包括誘導(dǎo)時間、培養(yǎng)溫度、IPTG濃度、誘導(dǎo)后培養(yǎng)時間)下,E.coli Rossetta(DE3)對AqpSS9的活性表達效率最高,AqpSS9表達量達48 mg/L。
   最后,為有效

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