水通道蛋白3和水通道蛋白9在功能性便秘結腸粘膜的表達及意義.pdf

1、功能性便秘(functional constipation，F(xiàn)C)是臨床上常見的消化道病癥，其診治已引起了廣泛關注。從早期認為便秘是腸道的功能性改變到發(fā)現(xiàn)一系列實質(zhì)性損害；從胃腸激素、神經(jīng)遞質(zhì)、腸神經(jīng)系統(tǒng)到cajal起搏細胞等對便秘病因病理的研究；從瀉劑濫用到目前我國《慢性便秘的診治指南》出臺；從單純內(nèi)科保守治療到外科手段的干預，我國便秘的臨床診治水平和基礎研究都在不斷提高。但目前對功能性便秘病因病理及臨床分型方面的認識以及診治規(guī)范方面

2、尚存在明顯不足；國內(nèi)少見從大腸的水分吸收和粘液分泌等生理功能變化的角度來研究便秘的發(fā)生發(fā)展，缺乏對大腸內(nèi)水通道蛋白(AQP，aqtJaporin)表達情況的系統(tǒng)性認識及相關的基礎研究。鑒于此，我們通過研究功能性便秘病人和對照組結腸黏膜水通道蛋白3(aquaporin，AQP3)和水通道蛋白9(aquaporin，AQP9)在結腸粘膜的表達與分布情況，以探討其與功能性便秘發(fā)生發(fā)展關系，為功能性便秘的診斷和治療提供新的靶點。 方法:

3、本實驗首先選取了45例功能性便秘患者(試驗組)和32例非便秘患者(對照組)，分別取其左右結腸標本。先用免疫組織化學技術(immunohistochemistry，IHC)檢測左右半結腸粘膜AQP3和AQP9的分布和表達情況；然后用蛋白質(zhì)印跡技術(Western bloting，wB)半定量檢測AQP3和AQP9，以β-actin作內(nèi)參蛋白，把染色后的硝酸纖維膜輸入真彩生物醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)，檢測每例AQP3和AQP9條帶灰度值，并分別與相

4、應β-actin灰度值相比，將灰度值之比看作受試對象的AQP3和AQP9的相對含量，兩者與相應β-actin灰度值之比即為AQP3和AQP9的相對含量，數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)檢驗呈正態(tài)分布，采用兩個獨立樣本的t檢驗，檢驗標準取α=0.05。 結果:1．結腸近端和遠端均有AQP3和AQP9表達的陽性細胞， AQP3陽性細胞主要位于結腸黏膜的項部，而以絨毛上皮細胞為主，杯狀細胞少見陽性染色，陽性細胞著色主要位于細胞膜，并以基底側和腔面為主；AQ

5、P9陽性細胞主要位于結腸黏膜腔面杯狀細胞和腺體內(nèi)部分杯狀細胞，且著色主要位于杯狀細胞的基底側。 2.對照組左半結腸和右半結腸AQP3灰度比值分別為0.701±0.013和0.798±0.012，兩者相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，試驗組左半結腸和右半結腸AQP3灰度比值分別為0.697±0.010和0.905±0.017，兩者相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。試驗組和對照組右半結腸差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，左半結腸統(tǒng)計

6、學無差異(P>0.05)。 3.對照組左半結腸和右半結腸AQP9灰度比值分別為0.732±0.012和0.543±0.010，兩者相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，試驗組左半結腸和右半結腸AQP9灰度比值分別為0.544±0.01 5和0.545±0.013，兩者相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。試驗組和對照組右半結腸差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，左半結腸統(tǒng)計學有意義(P<0.05)。 結論: 1.人左右半結

7、腸均有AQP3和AQP9的表達。AQP3主要位于右半結腸絨毛狀上皮細胞基底側細胞膜上，AQP9主要位于左半結腸粘膜杯狀細胞基底側細胞膜上。這說明AQP3與水分的吸收有關，而AQP9與粘液的分泌有關。 2.非便秘患者左半結腸AQP3表達低于右半結腸，便秘患者左半結腸AQP3表達仍低于右半結腸。對于右半結腸來說，便秘患者結腸粘膜AQP3表達增加，而左半結腸無明顯差異，這提示水分的吸收主要位于右半結腸。 3.非便秘患者左半結腸