慢病毒介導(dǎo)的vegfr2 RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長(zhǎng)中的VEGFR2作用機(jī)制.pdf

1、分類號(hào)UDC埸H1大季YANGZHOUUNIVERSITY學(xué)號(hào)叢圣!Q魚墨2密級(jí)碩士學(xué)位論文(全日制專業(yè)學(xué)位)慢病毒介導(dǎo)的vegfr2RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長(zhǎng)中的VEGFR2作用機(jī)制指導(dǎo)教師姓名：申清學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：學(xué)位授予單位：吳銀超堡亟笙墼握!揚(yáng)盟盤鱟!婆蒸塹劌12至5QQ窆夔室塹窒亟!壅蒸壅整型墊墼些堂墮122量蘭QQ碩士學(xué)科專業(yè)名稱：獸醫(yī)碩士2Q塵墾生壘旦論文答辯日期：2Q蘭壘生魚旦塵旦塹劌盤鱟學(xué)位授‘弘日期

2、：2Q至墨生魚旦答辯委員會(huì)主席：蔓3疊塹窒員2018年6月吳銀超：慢病毒介導(dǎo)的vegfr2RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長(zhǎng)中的VEGFR2作用機(jī)制慢病毒介導(dǎo)的vegfr2RNA干擾研究洛克沙胂體外促血管生長(zhǎng)中的VEGFR2作用機(jī)制摘要研究背景：血管新生在疾病的發(fā)病機(jī)制中有極其重要的作用，如果發(fā)生異常，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)疾病，如腫瘤、腦中風(fēng)、冠心病、多種眼科疾病等。VEGF／VEGFR2信號(hào)通路在血管新生過程中參與新血管的生長(zhǎng)與重建，血管生成

3、因子通過調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR2的活化及表達(dá)，進(jìn)而激活或抑制其下游相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的信號(hào)傳導(dǎo)，從而發(fā)揮調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)增殖與機(jī)體血管形成的作用。本課題組在前期研究發(fā)現(xiàn)洛克沙胂(ROX)在體內(nèi)外能促進(jìn)血管生成，使VEGFⅣEGFR2的表達(dá)上調(diào)。本文利用VEGFR2的有效沉默基因序列，構(gòu)建靶向vegfr2基因的siRNA重組慢病毒的載體系統(tǒng)。使用重組慢病毒感染內(nèi)皮細(xì)胞，沉默VEGFR2的表達(dá)，以此阻斷VEGF／VEGFR2信號(hào)通路

4、的傳導(dǎo)，研究VEGFR2在ROX促血管生成作用中的調(diào)節(jié)作用。研究目的：通過構(gòu)建慢病毒載體表達(dá)靶向vegfr2基因的shRNA，沉默VEGF／VEGFR2信號(hào)通路中的關(guān)鍵受體VEGFR2，研究ROX促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、體外血管生成作用中的VEGF／VEGFR2作用機(jī)制。方法：①重組慢病毒載體的構(gòu)建：分別構(gòu)建靶向大鼠vegff2基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體和陰性RNA對(duì)照的慢病毒載體。篩選出感染大鼠內(nèi)皮細(xì)胞的條件，通過RTPCR和Weste

5、rnBlot檢測(cè)VEGF的表達(dá)，評(píng)價(jià)所建慢病毒載體對(duì)靶基因的干擾效率。②靶向vegfr2慢病毒載體干擾對(duì)ROX促進(jìn)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：不同處理分組如下：PBS組、10LM的ROX組、NC組(陰’ItshRNA組)、sh—vegff2組、shvegff2ROX組。通過內(nèi)皮細(xì)胞BrdU陽性率、遷移距離、管樣結(jié)構(gòu)的節(jié)點(diǎn)數(shù)和分支長(zhǎng)度，分別檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移距離和管樣結(jié)構(gòu)的形成能力；WesternBlot檢測(cè)感染內(nèi)皮細(xì)胞中VEG