洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表達(dá)研究.pdf

1、洛克沙胂是國(guó)內(nèi)外廣泛使用的一種有機(jī)胂飼料添加劑，近來(lái)的研究表明其能促進(jìn)人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，存在著促血管生成作用及潛在的致癌風(fēng)險(xiǎn)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前已知的最重要的血管生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)洛克沙胂促血管生成作用及其VEGF的調(diào)控研究還基本是空白。本研究擬通過(guò)基質(zhì)膠塞血管生長(zhǎng)模型、對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)影響來(lái)研究洛克沙胂體內(nèi)外促血管生長(zhǎng)作用及對(duì)VEGF表達(dá)的影響，為探討洛克沙胂可能的特殊毒性及潛在的致癌風(fēng)險(xiǎn)研究積累基本資料，

2、也為洛克沙胂作為飼料添加劑在畜禽生產(chǎn)中使用安全性的研究有積極意義。
　　基質(zhì)膠塞模型實(shí)驗(yàn)中，劑量設(shè)置分別為洛克沙胂0.10μM、1.00μM、10.00μM，10 ng/mL采用VEGF為陽(yáng)性對(duì)照，PBS為陰性對(duì)照。內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同的處理后注射于ICR小鼠的皮下，10天后檢測(cè)形成膠塞的體積、重量及血紅蛋白的含量。結(jié)果表明，洛克沙胂處理各組膠塞體積、重量及血紅蛋白含量均明顯大于PBS對(duì)照組（P＜0.05）;洛克沙胂在0.10μM～1

3、.00μM范圍內(nèi)，隨劑量增加基質(zhì)膠塞體積、重量和血紅蛋白的含量隨之升高，但10.00μM洛克沙胂劑量組膠塞的體積、重量和血紅蛋白的含量反而減小，且均小于1.00μM。1.0μM洛克沙胂組的血紅蛋白含量與VEGF組相當(dāng)。
　　大鼠內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中，劑量組分別為10.00μM、1.00μM、0.10μM、0.01μM洛克沙胂，1.00μM+Anti-FLT、1.00μM+Anti-KDR，及Anti-FLT、Anti-KDR、Ant

4、i-VEGF和PBS對(duì)照組。內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)6h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活力;ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中VEGF的量;Werstern Blot檢測(cè)細(xì)胞中VEGF的表達(dá)。管形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)洛克沙胂形成血管的能力。
　　MTT的結(jié)果表明，0.10～10.00μM洛克沙胂處理及VEGF組細(xì)胞活力顯著高于PBS對(duì)照(P＜0.05），1.00μM組OD值最高;1.00μM+Anti-KDR組顯著低于1.00μM組(P＜0.05）;1.00μM+An

5、ti-FLT組與1.00μM組無(wú)顯著差異(P＞0.05); Anti-KDR和Anti-VEGF組顯著低于PBS對(duì)照(P＜0.05），而Anti-FLT與PBS無(wú)顯著差異(P＞0.05）。結(jié)果表明洛克沙胂具有明顯的促內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，且1.00μM促生長(zhǎng)能力最強(qiáng);洛克沙胂促內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)明顯與VEGF、KDR有關(guān)。
　　內(nèi)皮細(xì)胞管形成試驗(yàn)中，0.01μM、0.10μM、1.00μM、10.00μM洛克沙胂處理組形成的管數(shù)顯著高于P

6、BS對(duì)照組;0.01～1.0μM范圍內(nèi)，隨劑量增加形成的管數(shù)增加，1.00μM組最高，10.00μM組反而減少。
　　內(nèi)皮細(xì)胞不同處理后培養(yǎng)上清中VEGF含量測(cè)定表明，0.10μM、1.00μM、10.00μM洛克沙胂組顯著高于PBS對(duì)照組(P＜0.05)，且1.0μM組最高;1.00μM+Anti-KDR組顯著高于1.00μM組(P＜0.05);1.00μM+Anti-FLT組與1.00μM組無(wú)顯著差異(P＞0.05）;而Ant

7、i-KDR和Anti-FLT分別低于1.00μM+Anti-KDR和1.00μM+Anti-FLT組。表明洛克沙胂可刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF，阻斷受體FLT對(duì)細(xì)胞上清中VEGF的濃度無(wú)明顯影響，而KDR阻斷后使培養(yǎng)液中VEGF的濃度明顯上升。Western Blot檢測(cè)表明0.10μM、1.00μM、10.00μM洛克沙胂組的VEGF表達(dá)均顯著高于PBS對(duì)照，且1.00μM組表達(dá)最強(qiáng)。
　　綜上所述，洛克沙胂在0.1～10.00μ