EBV感染在潮汕賁門癌變組織中的作用研究.pdf

1、目的：
　　賁門癌是廣東潮汕地區(qū)的高發(fā)惡性腫瘤之一，其發(fā)病機制并未闡明，很可能是有別于食管鱗狀細胞癌和胃遠端腺癌，應(yīng)作為一種獨立的疾病對其進行病因及發(fā)病機制的深入研究。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，是多種基因發(fā)生損傷、突變等不穩(wěn)定現(xiàn)象后累積或疊加的綜合結(jié)果。相關(guān)的研究提示，部分微生物（包括病毒）的持續(xù)感染會造成宿主基因組發(fā)生損傷、突變等，這與機體相應(yīng)部位惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性極高。12％-15%的惡性腫瘤都是由各種致癌病毒的

2、感染引起的，致癌病毒可以誘導(dǎo)細胞的基因組發(fā)生不穩(wěn)定的變化，阻止細胞的自然凋亡，激活各種與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號通路以及促進炎癥發(fā)生的信號通路等等。其中與腫瘤相關(guān)性較高的有 EB病毒，人乳頭瘤病毒和巨細胞病毒，他們在多種腫瘤中都有一定的感染率，并且在腫瘤的發(fā)生過程中都起著重要的作用。因此，探究病毒在賁門癌中的感染情況以及在賁門癌變過程中的作用具有重要意義。EB病毒，人乳頭瘤病毒和巨細胞病毒在其他腫瘤中已被廣泛研究，而在賁門癌中研究尚少，本

3、研究通過對賁門癌組織中 EB病毒、人乳頭瘤病毒和巨細胞病毒的感染情況以及EB病毒的EBNA-1和EBER在賁門癌變過程中的表達進行研究，進一步探究和發(fā)現(xiàn)病毒在賁門癌中的作用和賁門癌的早期分子診斷標(biāo)記。
　　方法：
　?、攀占?013.03-2017.03之間來自汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院的外科手術(shù)切除標(biāo)本147例賁門癌的原發(fā)病灶、配對的癌旁組織和遠端正常組織。并收集2016.05-2017.03之間來自潮州市人民醫(yī)院內(nèi)鏡室的非賁

4、門癌患者的內(nèi)鏡取材標(biāo)本96例。⑵將組織處理后進行HE染色，觀察組織形態(tài)做出病理診斷。⑶提取新鮮組織DNA，采用巢式PCR檢測病毒感染情況。⑷對PCR產(chǎn)物為陽性的進行sanger測序驗證。⑸將新鮮組織DNA采用Q-PCR進行EB病毒LMP-1的定量分析。⑹采用二步法檢測賁門石蠟組織中 EBNA-1、CD3、CD4、CD20等指標(biāo)的表達。⑺檢測賁門石蠟組織中EBER的表達情況。⑻采用OLYMPUS顯微鏡對切片的染色結(jié)果進行采圖分析。⑼采用S

5、PSS16.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析統(tǒng)計，采用卡方檢驗、Mann-Whitney U檢驗、Spearman相關(guān)分析。P值<0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　?、貳BV、HPV、HCMV在賁門癌患者中的感染率（63.27%，40.14%，27.89%）高于非癌患者（27.08%，8.33%，0%）；HPV在癌旁組織中的感染率明顯高于癌組織和正常組織（p<0.05），HCMV則在癌組織中較高；EBV在同一患者的癌旁組織

6、中的拷貝數(shù)顯著高于癌組織（p<0.01）。②EBV、HCMV的感染率與慢性炎癥顯著相關(guān)，隨著炎癥級別的升高，感染率也有所上升（rs=0.156，p<0.01；rs=0.159，p<0.01）。③EBNA-1在上皮內(nèi)瘤變組織中的表達高于癌組織和正常組織(p<0.05），在上皮內(nèi)瘤變、正常和癌組織中呈遞減的趨勢；而EBER主要在淋巴細胞中表達。④經(jīng)免疫組化標(biāo)記，感染 EBNA-1并且進入腺體中的淋巴細胞主要以 T淋巴細胞為主，但CD4、CD