潮汕人群賁門Hpylori感染、CD74表達(dá)與上皮增生的相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的：
　　幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一種微需氧革蘭氏陰性菌,定植于人上消化道。流行病學(xué)資料顯示,全世界人群中的H.pylori感染率超過50％,發(fā)展中國(guó)家甚至超過80%。作為“一級(jí)致癌因子”,H.pylori感染后引起胃粘膜慢性炎癥,消化性潰瘍,并與胃粘膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤、胃腺癌等消化系統(tǒng)腫瘤密切相關(guān),甚至還與某些血管性疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病、皮膚病、糖尿病等其

2、它系統(tǒng)疾病相關(guān)。雖然H.pylori發(fā)現(xiàn)將近30年,但是其感染途徑、發(fā)病機(jī)制,特別是與腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚不明確。賁門粘膜組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和pH環(huán)境與遠(yuǎn)端胃相比,對(duì)H.pylori定植、生存、感染有自身特殊性,關(guān)于賁門粘膜組織感染H.pylori后,引發(fā)相關(guān)病變的報(bào)道,較為少見,其H.pylori的致病機(jī)制更不明確。研究發(fā)現(xiàn)CD74可作為H.pylori的受體,增強(qiáng)H.pylori的吸附能力,加強(qiáng)其致病性。本實(shí)驗(yàn)首先用改良Giemsa染色、H

3、pylori特異性免疫組織化學(xué)染色,檢測(cè)H.pylori在潮汕人賁門普查及活檢標(biāo)本中的分布情況,分析在不同病理改變時(shí)H.pylori定植密度的差異;其次運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)賁門腺上皮CD74蛋白的表達(dá)水平,比較分析CD74蛋白表達(dá)水平與H.pylori定植密度的關(guān)系,進(jìn)一步運(yùn)用Simple同部位標(biāo)記和消除抗體法、免疫熒光雙重標(biāo)記技術(shù),觀察CD74蛋白表達(dá)與幽門螺桿菌定植分布的原位關(guān)系;最后運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Ki-67陽性細(xì)胞的

4、增殖指數(shù),分析H.pylori定植密度、CD74蛋白的表達(dá)與賁門上皮Ki-67陽性細(xì)胞增殖水平之間的關(guān)系,初步探討幽門螺桿菌致病機(jī)制,為賁門癌前病變的發(fā)生發(fā)展提供一定的根據(jù)。
　　材料和方法：
　　材料：
　　收集汕頭大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院、汕頭大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃鏡室和病理科及揭陽市人民醫(yī)院病理科普查標(biāo)本共218例,其中男性146例,女性72例,最小年齡22歲,最大年齡80歲,平均年齡56.6歲。
　　方法：
　

5、　1.HE染色
　　常規(guī)HE染色,觀察賁門粘膜的炎癥等級(jí)和上皮增生情況。
　　2.Giemsa染色
　　改良Giemsa染色,觀察H pylori在組織中的定植密度和分布。
　　3.免疫組織化學(xué)染色
　　SP免疫組織化學(xué)法:觀察H pylori免疫陽性細(xì)菌在賁門粘膜組織中分布情況;CD74單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色,觀察腺上皮細(xì)胞的表達(dá)情況;Ki-67單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色觀察上皮細(xì)胞增生情況。

6、　　4.Simple同部位標(biāo)記、消除抗體法和免疫熒光雙重標(biāo)記
　　Simple同部位標(biāo)記、消除抗體法和免疫熒光雙重標(biāo)記技術(shù),觀察H pylori和CD74在賁門粘膜組織中的分布,與腺上皮細(xì)胞的表達(dá)情況,分析幽門螺桿菌的分布位置和CD74的蛋白表達(dá)水平的相互關(guān)系。
　　5.圖像分析法
　　應(yīng)用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng),對(duì)CD74和Ki-67染色結(jié)果分析,CD74蛋

7、白表達(dá)水平采樣計(jì)算圖像陽性表達(dá)的平均光密度,Ki-67采用計(jì)算每張切片的陽性標(biāo)記指數(shù)(Cell proliferation count Cpc),分析表達(dá)情況。
　　6.統(tǒng)計(jì)分析
　　應(yīng)用SPSS13.0對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行分析,采用方差分析,卡方檢驗(yàn),Spearman相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1、(1)運(yùn)用改良Giemsa染色和SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)H pylori的分布發(fā)現(xiàn):H.pylori主要定植于賁門粘膜表面

8、、腺體的腺腔內(nèi)和血管的周圍,部分H.pylori具有紅細(xì)胞親和性;
　　(2)運(yùn)用Simple同部位標(biāo)記、消除抗體法和免疫熒光雙重標(biāo)記技術(shù)分析H pylori的分布位置和CD74的蛋白表達(dá)水平的相互關(guān)系發(fā)現(xiàn):部分H pylori與CD74強(qiáng)表達(dá)的細(xì)胞結(jié)合緊密。
　　2、運(yùn)用單向方差分析發(fā)現(xiàn):H pylori感染陰性和H pylori感染陽性賁門粘膜中CD74表達(dá)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01);在H pylori(+)、H

9、 pylori(++)、H pylori(+++)各組之間,隨H pylori定植密度加重,CD74的表達(dá)相應(yīng)增強(qiáng),各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　3、(1)運(yùn)用卡方檢驗(yàn)分析H pylori定植密度與炎癥等級(jí)之間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X2=20.71(p<0.01):炎癥等級(jí)隨著幽門螺桿菌感染程度加重而升高。
　　(2)運(yùn)用單向方差分析CD74蛋白表達(dá)水平與炎癥等級(jí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　4、運(yùn)

10、用Spearman相關(guān)分析顯示:H.pylori定植密度、CD74蛋白表達(dá)增強(qiáng)都與Ki-67增殖水平呈正相關(guān)(rs分別為0.624和0.515,p<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、H.pylori主要定植于賁門粘膜上皮表面和腺體的腺腔內(nèi)。
　　2、H.Pylori的定植密度與CD74蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān),H.Pylori與CD74蛋白強(qiáng)表達(dá)的上皮細(xì)胞緊密結(jié)合,提示CD74作為H.pylori的受體,參與并增強(qiáng)H.p

11、ylori在胃粘膜上皮定植,是H.pylori致病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,并且CD74蛋白可能在H.Pylori與賁門上皮細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)中可能發(fā)揮相關(guān)的作用。
　　3、H.pylori感染增加賁門粘膜局部炎癥反應(yīng),并且CD74蛋白表達(dá)增加,提示CD74在H.pylori感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著一定的作用。
　　4、H.pylori定植密度、CD74蛋白表達(dá)增強(qiáng)均與Ki-67增殖水平呈正相關(guān),提示前二者相互作用在賁門增生等癌前病變