潮汕人群1型糖尿病胰島素基因甲基化狀態(tài)及相關(guān)性分析.pdf

1、背景與目的：全球各地區(qū)、不同種族、具有遺傳穩(wěn)定性的人群1型糖尿?。═ype1 Diabetes Mellitus,T1DM）發(fā)病率顯著升高，與T1DM的易感基因頻率的增長(zhǎng)并不一致，大量研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境因素可通過(guò)表觀遺傳機(jī)制改變基因的表達(dá)，因此學(xué)者們推測(cè)表觀遺傳改變可能誘發(fā)T1DM。DNA甲基化是表觀遺傳機(jī)制中關(guān)鍵的修飾途徑之一，通過(guò)增加CpG位點(diǎn)上DNA的甲基，選擇性地把甲基團(tuán)轉(zhuǎn)移至胞嘧啶，形成5-甲基胞嘧啶，啟動(dòng)子區(qū)域富含CpG區(qū)域的高甲

2、基化模式可以導(dǎo)致基因失活、基因表達(dá)的下調(diào)。DNA甲基化水平受外界環(huán)境改變、機(jī)體生理或者疾病狀態(tài)、年齡等因素影響處于動(dòng)態(tài)的變化過(guò)程中。目前，許多研究發(fā)現(xiàn)DNA甲基化參與代謝性疾病、腫瘤、帕金森氏病等疾病的發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后等疾病過(guò)程。由于表觀遺傳改變對(duì)基因表達(dá)的影響具有可調(diào)控性，也就是說(shuō)其極可能成為治療靶點(diǎn)。目前T1DM的表觀遺傳學(xué)研究剛剛起步，胰島素基因（insulin,INS）是與T1DM最為緊密相關(guān)基因之一，最近研究顯示T1DM患者I

3、NS啟動(dòng)子區(qū)域CpG位點(diǎn)甲基化水平可發(fā)生改變，但其與T1DM病因、殘存的胰島β細(xì)胞功能及血糖控制情況等臨床特征的關(guān)系尚不明確。潮汕人群保留中原漢族較為純正的基因遺傳特點(diǎn)，本研究擬進(jìn)一步探討INS啟動(dòng)子區(qū)域CpG位點(diǎn)甲基化在漢族T1DM發(fā)病機(jī)制的作用以及CpG位點(diǎn)的甲基化水平與T1DM患者血糖水平與β細(xì)胞功能等臨床特征的相關(guān)性。
　　材料和方法：本研究招募已在“中國(guó)1型糖尿病發(fā)病、管理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)狀況的初步研究”項(xiàng)目注冊(cè)登記數(shù)據(jù)中的7

4、6例T1DM患者（T1DM組）以及40例性別、年齡、BMI相匹配的正常對(duì)照組（Ctrl組），通過(guò)MassARRAY分子量陣列基因分析系統(tǒng)EpiTYPER DNA甲基化分析技術(shù)檢測(cè)兩組研究對(duì)象外周血白細(xì)胞DNA中的INS啟動(dòng)子區(qū)域9個(gè)CpG位點(diǎn)（CpG-357bp，-345bp，-234bp，-206bp，-135bp，-102bp，-69bp，-19bp，+63bp）甲基化水平和收集一般情況與臨床資料，分析CpG位點(diǎn)甲基化水平與一般情況

5、、血清肌酐水平、血脂水平、HbA1c水平、空腹及餐后2小時(shí)血漿葡萄糖水平、空腹及餐后2小時(shí)血清C肽水平、糖尿病自身抗體等臨床特征的相關(guān)性以及9個(gè)CpG位點(diǎn)之間的相關(guān)性。數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。統(tǒng)計(jì)圖采用GraphPad Prism6.0繪制。
　　結(jié)果：
　　1.T1DM組CpG-135,-102,-19,+63位點(diǎn)甲基化水平低于Ctrl組（分別為0.74±0.12 VS0.86±

6、0.03，0.57±0.13 VS0.64±0.12,0.68±0.13 VS0.79±0.12，0.93±0.02 VS0.95±0.02，P值均＜0.005）。
　　2.在T1DM組中，抗體陽(yáng)性組（GAD65,ICA,IAA或ZnT8至少有一個(gè)陽(yáng)性）CpG+63位點(diǎn)甲基化水平低于陰性組（0.93±0.02 VS0.94±0.02 P=0.022）。
　　3.在T1DM組中僅有CpG-357位點(diǎn)甲基化水平與空腹及餐后2h血

7、糖（r=0.373,0.371;95％CI(0.119,0.568)(0.077,0.560); P＜0.005）正相關(guān)，與空腹和餐后2h C肽水平（r=-0.361,-0.319,95%CI(-0.602,-0.039)(-0.595,-0.090);P＜0.05）負(fù)相關(guān)。
　　4. T1DM組9個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化水平之間分別有不同程度的相關(guān)性，特別是CpG-135,-102,-19,+63與CpG-357位點(diǎn)之間。