豬TIM1和TIM3基因的特征與功能分析.pdf

1、CD4+T細胞遇到抗原激活后至少分化為兩類效應(yīng)細胞Th1和Th2。Th1細胞分泌以IFN-γ為標志的細胞因子并介導(dǎo)細胞內(nèi)病原體的免疫應(yīng)答,它的紊亂可導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)、自身免疫疾病如實驗性自身免疫性腦炎和Ⅰ型糖尿病。Th2細胞分泌以IL-4為標志的細胞因子并介導(dǎo)細胞外病原體的免疫應(yīng)答,它的紊亂可導(dǎo)致哮喘和過敏性疾病。Th1細胞和Th2細胞相互之間存在著互相調(diào)節(jié),當Th1細胞比例占優(yōu)時可以調(diào)節(jié)哮喘以及過敏性疾病,Th2細胞比例占優(yōu)時可以抑

2、制自身免疫性疾病。研究表明TIM1和TIM3分別是調(diào)節(jié)Th2細胞和Th1細胞的重要基因,此外TIM1和TIM3基因還存在與哮喘和過敏癥等疾病相關(guān)的多態(tài)位點。因而TIM1和TIM3基因的表達調(diào)控和功能對Th1與Th2細胞之間的相對平衡以及機體的免疫力具有重要影響。
　　 本研究通過生物信息學(xué)和比較基因組學(xué)方法克隆了豬TIM1和TIM3基因的完整編碼區(qū),利用分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)技術(shù),從核酸序列及細胞兩個水平上對其特征進行了研究,主

3、要取得了如下研究結(jié)果:
　　 (1)通過生物信息學(xué)和比較基因組學(xué)克隆了豬TIM1基因和TIM3基因的完整CDS區(qū),TM1和TIM3都位于豬第16號染色體上而且彼此緊密相連。經(jīng)預(yù)測TIM1包括一個1050bp的開放閱讀框,編碼蛋白349個氨基酸殘基,推測其有8個外顯子和7個內(nèi)含子。TIM3包括一個852bp的開放閱讀框,編碼蛋白284個氨基酸殘基,推測其有7個外顯子和6個內(nèi)含子,外顯子和內(nèi)含子之間序列銜接遵循GT-AG規(guī)則。

4、>　　 (2)組織表達譜顯示TIM1 mRNA在正常各個組織中表達均比較低,而TIM3mRNA在各個組織中表達高低不等。TIM1和TIM3 mRNA在脾中表達都相對最高,而在肌肉中幾乎都不表達。
　　 (3)亞細胞定位結(jié)果顯示TIM3蛋白定位于細胞膜上。
　　 (4)在TIM3基因的第2、第3、第5、第7以及啟動子上發(fā)現(xiàn)了多個SNP位點,并在第2外顯子的一個SNP位點上應(yīng)用AccI-RFLP方法在溫氏群體中進行檢測,發(fā)

5、現(xiàn)該位點與紅細胞計數(shù)(RBC)顯著相關(guān)(P=0.0409),與平均紅細胞血紅蛋白量(MCH)顯著相關(guān)(P=0.0294)；對于17日齡仔豬,該位點與紅細胞計數(shù)(RBC)極顯著相關(guān)(P=0.0089),與紅細胞壓積(HCT)顯著相關(guān)(P=0.0168)；對于32日齡仔豬,該位點與淋巴細胞(％)(LYM)極顯著相關(guān)(P=0.0048),與淋巴細胞絕對值(LY)顯著相關(guān)(P=0.033)。
　　 (5)克隆了豬TIM3基因5'側(cè)翼區(qū)大