Tim-1和Tim-3在幽門螺桿菌感染和疫苗免疫后的表達及意義.pdf

1、背景和目的： 機體的免疫反應(yīng)在幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，H.pylori）致病和H。pylori疫苗的免疫保護中均起重要作用，因此闡明Hpylori感染的免疫致病機制和且pylori疫苗的免疫保護機制，對于H.pylori相關(guān)性疾病的防治具有十分重要的意義。Th免疫反應(yīng)在H.pylori感染的免疫致病及疫苗的免疫保護中均起著重要作用。但是H.pylori感染和H.pylori疫苗接種究竟通過何種機制影響

2、Th反應(yīng)，目前尚不清楚。T細胞免疫球蛋白黏蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)分子（T-cell immunoglobulin and mucin-domain-contairung molecule，Tim）是新近發(fā)現(xiàn)在T細胞表面的跨膜蛋白家族，它對CD4+T細胞分化成Th1和Th2細胞，調(diào)控效應(yīng)T細胞（Th1和Th2）的應(yīng)答起著重要作用，Tim-1和Tim-3是Tim家族中的兩個重要成員，它們分別在分化成熟的Th2和Th1細胞表達，并參與Th免疫反應(yīng)的調(diào)

3、控。H.pylori感染及疫苗接種對Tim的影響目前尚不清楚，為此本研究在體內(nèi)外觀察了H.pylori感染及疫苗接種后Tim-1及Tim-3的表達，及其與Th1和Th2免疫反應(yīng)的關(guān)系，旨在初步探討H.pylori感染和H.pylori疫苗接種影響Th反應(yīng)的機制，為后續(xù)以Tim-1和Tim-3為靶點防治H.pylori感染和H.pylori相關(guān)性疾病提供理論和實驗依據(jù)。 方法： （1）H.pylori與小鼠脾淋巴細胞共培養(yǎng)

4、：以不同濃度的SS1 H.pylori活菌（0CFU/ml、0.50×107CFU/ml、1.00×107CFU/ml、2.00×107CFU/ml、4.00×107CFU/ml）與原代分離的BALB/c小鼠脾淋巴細胞共培養(yǎng)，分別在3h、6h、12h和24h點收集細胞。 （2）小鼠H.pylori感染模型建立和根除治療：6-8周齡的清潔級的BALB/c小鼠，給予含1.0×109/ml的SS1 H.pylori活菌液，0.5ml/

5、只，灌胃，隔日一次，共5次。建立動物模型后，隨機分為2組：H.pylori感染組：僅給予藥物賦形劑5％阿拉伯樹膠溶液；H.pylori根除組：給予洛賽克（質(zhì)子泵抑制劑，PPI）0.06 mg/次/只，羥氨芐青霉素2.9mg/次/只，克拉霉素1.5 mg/次/只和5％阿拉伯樹膠溶液。分別給予上述藥物每日2次灌胃，共2周。另設(shè)一正常對照組不給予H.pylori和任何藥物。停藥后4周，處死小鼠，取標本待測。 （3）H.pylori疫苗

6、免疫保護接種：6～8周齡的清潔級BALB/c小鼠隨機分為以下3組：正常對照組：不接種疫苗也不給予H.pylori攻擊；疫苗對照組：PBS溶液；疫苗免疫組：H.pylori抗原+殼聚糖顆粒+CT組，后二組于第0、7、14、21天灌胃各免疫1次，末次免疫后4周給予1.0×109CFU/ml的SSl H.pylori菌液0.5ml/只進行攻擊，隔日一次，共2次。4周后，處死小鼠，取標本待測。 （4）各項指標檢測：①胃黏膜內(nèi)H.pylo

7、ri的檢測：采用改良Giemsa染色和H.pylori定量培養(yǎng)；②血清抗H.pylori IgG1、IgG2a和胃黏膜內(nèi)IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10含量的檢測：采用間接ELISA法和雙抗體夾心ELISA法；③脾和淋巴細胞細胞內(nèi)Tim-1和Tim-3 mRNA檢測：采用RT-PCR方法。④Tim-3陽性細胞檢測：采用流式細胞術(shù)。 結(jié)論： 1.H.pylori在體外可下調(diào)小鼠淋巴細胞Tim-1的表

8、達，上調(diào)Tim-3的表達，并降低Tim-1/Tim-3比值，提示它可抑制T淋巴細胞向Th2細胞分化，促進T淋巴細胞向Th1細胞分化，誘導Th1優(yōu)勢的免疫反應(yīng)。 2.在體內(nèi)H.pylori感染能下調(diào)小鼠脾臟內(nèi)Tim-1的表達，上調(diào)Tim-3的表達，使Tim-1/Tim-3比值下降，而H.pylori根除后Tim-1表達回升，Tim-3表達下降，Tim-1/Tim-3比值上升，提示H.pylori感染可誘導Th1優(yōu)勢的免疫反應(yīng)，而H

9、.pylori根除后可逆轉(zhuǎn)H.pylori感染所致的Th1優(yōu)勢的免疫反應(yīng)。 3.H.pylori疫苗接種后可上調(diào)小鼠脾臟Tim-1和Tim-3 mRNA的表達，使Tim-1/Tim-3比值上升，提示H.pylori疫苗接種可誘導Th1和Th2混合免疫反應(yīng)，并可逆轉(zhuǎn)H.pylori感染所致的Th2反應(yīng)抑制，恢復Th1/Th2免疫反應(yīng)的平衡。 4.在H.pylori感染和疫苗接種各組Tim-1的表達與反映Th2免疫反應(yīng)的抗H