電擊死大鼠皮膚特殊染色與心臟HIF-2α、h-FABP表達變化研究.pdf

1、目的:電流通過人體引起的可感知的物理效應稱為電擊，因電流作用導致人體死亡，稱電擊死(electric death)。在法醫(yī)實踐中由電流引起的損傷或死亡比較多見，且多為意外或災害事故，也可見于自殺和他殺。電流斑(electric mark)是判斷電擊死的主要形態(tài)學依據，然而在低電壓、環(huán)境潮濕、水中觸電等情況下則有可能不形成電流斑，此類案件一般是結合案情、現(xiàn)場和尸體檢驗等方面綜合作出判斷，法醫(yī)學檢驗尚缺乏形態(tài)學依據，因此電擊死尤其是無明顯電

2、流斑電擊死的判定以及生前與死后電擊的鑒別診斷仍然是法醫(yī)病理學亟待解決的問題。
　　本實驗建立在大鼠電擊死模型的基礎上，利用HE染色、EVG染色、Alcian blue-核固紅染色、掃描電鏡以及X線能譜檢測法觀察大鼠電擊部位皮膚的特異性改變;同時對心臟缺氧誘導因子2α(HIF-2α)、心臟型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)蛋白含量進行檢測，以期為電擊死的法醫(yī)學判定提供依據。
　　方法:
　　1大鼠皮膚HE染色、皮膚EVG染

3、色、皮膚Alcian blue-核固紅染色和心肌免疫組織化學染色實驗分組:健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只，雌雄不限，體重220±10g，適應環(huán)境喂養(yǎng)1周，按完全隨機分組方法隨機分為電擊死組、死后電擊組、正常對照組，每組24只。電擊死組大鼠經水合氯醛腹腔注射麻醉后連接自制電擊裝置，金屬夾連接大鼠左前肢與右后肢，接通電源(220V,50Hz)電擊至死，各亞組（每組8只）分別于死后即刻、死后30min、死后1h取電擊部位皮

4、膚和心臟;死后電擊組大鼠水合氯醛麻醉后頸椎脫臼法處死，各亞組（每組8只）分別于死后即刻、死后30min、死后1h連接電擊裝置通電2min，電擊后立即取電擊部位皮膚和心臟;對照組大鼠麻醉后頸椎脫臼法處死，連接自制電擊裝置2min，不通電，各亞組（每組8只）分別于死后即刻、死后30min、死后1h取電擊部位皮膚和心臟。組織取出后，立即放入4％多聚甲醛固定液中。
　　2皮膚掃描電鏡與X射線能譜分析實驗分組:健康Sprague-Dawle

5、y(SD)大鼠60只，雌雄不限，體重220±10g，適應環(huán)境喂養(yǎng)1周，按完全隨機分組方法隨機分為電擊死組、死后電擊組、正常對照組，每組20只。電擊死組大鼠經水合氯醛注射麻醉后連接自制電擊裝置，金屬夾連接大鼠左前肢與右后肢，接通電源(220V,50Hz)電擊至死，按連接金屬片的不同分為銅、鐵、鋁、鉛四個亞組，每組5只，死后立即取電擊部位皮膚;死后電擊組大鼠水合氯醛麻醉后頸椎脫臼法處死，于死后連接電擊裝置通電2min，按連接金屬片的不同分為

6、銅、鐵、鋁、鉛四個亞組，電擊后立即取電擊部位皮膚;對照組大鼠麻醉后頸椎脫臼法處死，連接自制電擊裝置2min，按連接金屬片的不同分為銅、鐵、鋁、鉛四個亞組，不通電，取電擊部位皮膚。
　　數(shù)據以“均數(shù)±標準差(Mean±SD)”表示，用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA)，用最小顯著差法(least significant difference，LSD)作兩兩比較，以P＜0.05為有顯著

7、統(tǒng)計學差異。
　　結果:
　　1大鼠皮膚染色
　　1.1大鼠皮膚HE染色
　　正常對照組HE染色可見表皮細胞排列整齊，細胞核無極性化改變;電擊死組與死后電擊組大鼠皮膚光鏡下可見表皮細胞融合變薄，部分缺損，有燒焦表現(xiàn)，細胞胞漿著色較深，部分表皮細胞嗜酸性改變，基底層細胞和核縱向拉長，表皮細胞層及其下層大量空泡形成，真皮層有凝固性壞死。
　　1.2大鼠皮膚EVG染色
　　EVG染色可將細胞核和彈性纖維染成

8、黑色，膠原纖維染成紅色。對照組大鼠皮膚彈力纖維整齊，細胞核清晰。電擊組大鼠表皮部分缺損，細胞核可見極性化改變，彈力纖維可見扭曲，部分斷裂，因收縮而變得較為粗短，膠原纖維層均質化，染色能力減弱，皮下可見出血。死后電擊組大鼠表皮可見極性化改變，彈力纖維扭曲，部分斷裂，因收縮而變得較為粗短，網織層均質化。
　　1.3大鼠皮膚Alcian blue-核固紅染色
　　Alcian blue-核固紅染色可將細胞核染成紅色，酸性黏蛋白、蛋

9、白多糖和透明質酸染成藍色。對照組大鼠皮膚網織層纖維藍染，細胞核紅染。電擊死組與死后電擊組大鼠皮膚可見棘細胞層及基底層細胞核極性化改變;網織層均質化，藍色未能著色，呈現(xiàn)較均勻一致的粉色;部分細胞核藍染。
　　2皮膚掃描電鏡X射線能譜分析
　　2.1皮膚掃描電鏡
　　正常對照組皮膚電鏡下觀察可見復層扁平上皮排列整齊，細胞界限清晰。電擊死組鏡下可見大量細胞碎屑，細胞界限不清，細胞表面可見枯焦狀龜裂，散在圓形和橢圓形小孔，邊緣

10、不規(guī)則，散在存在大量球形異物顆粒;死后電擊組改變與電擊死組相一致。
　　2.2皮膚X射線能譜分析
　　對照組皮膚經X射線能譜分析未檢測出銅、鐵、鋁、鉛等金屬元素，電擊死各亞組均檢出與接觸電極片相一致的金屬元素，死后電擊組各亞組也均檢出與接觸電極片相一致的金屬元素，且元素含量與電擊死組存在一定差異。
　　3心臟免疫組化染色結果
　　3.1心臟HIF-2α免疫組化染色結果
　　HIF-2α蛋白在心肌細胞內表達為

11、細胞核著色。對照組大鼠心臟偶見少量陽性表達，且各亞組無明顯差異;電擊死即刻組心肌細胞陽性表達明顯增強，電擊死30min組陽性表達與即刻組比較無明顯差異，電擊死60min組陽性表達減弱，但仍高于正常60min組;死后即刻電擊組心肌細胞陽性表達較正常對照組增加，低于電擊死即刻組，死后30min電擊組、死后60min電擊組陽性表達與正常30min、60min對照組比較無明顯差異。3.2心臟H-FABP免疫組化染色結果
　　H-FABP蛋

12、白在心肌細胞的表達為細胞胞漿著色。正常對照組大鼠心肌細胞陽性表達，可見少量點狀缺染;電擊死組大鼠心肌細胞可見缺染，且缺染面積隨時間延長逐漸增大，即缺染面積:電擊死即刻組＜電擊死30min組＜電擊死60min組;死后即刻電擊組大鼠心肌細胞可見缺染，缺染面積高于對照組，小于電擊死即刻組，死后30min電擊組、死后60min電擊組組與死后即刻電擊組比較無明顯差異。
　　結論:
　　1電擊后大鼠皮膚EVG染色和Alcian blue