布萊凱特肉牛H-FABP基因的序列測定與序列分析.pdf

1、[目的]:
　　 心臟脂肪酸結(jié)合蛋白由心臟脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）基因所編碼，主要在畜禽的心肌、骨骼肌和乳腺中表達。心臟脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)基因是肌內(nèi)脂肪的候選基因，它能影響肌內(nèi)脂肪(IMF)的含量，對牛肉的肉質(zhì)品質(zhì)具有重要作用。本試驗以布萊凱特肉牛為研究對象，對其H-FABP基因進行測序和序列分析，為進一步開展布萊凱特肉牛H-FABP基因與肉質(zhì)性狀的相關分析，進行標記輔助選擇及基因定位研究提供理論基礎。

2、　　 [方法]:
　　 根據(jù)GenBank發(fā)表的牦牛心臟脂肪酸結(jié)合蛋白基因（H-FABP）的序列設計13對引物，分13段擴增出布萊凱特肉牛H-FABP基因，對各個片段進行克隆測序，使用生物信息學軟件對各個片段的測序結(jié)果進行拼接，得到布萊凱特肉牛心臟脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)基因的全序列，同時進行序列分析，并對其基因的分子特性進行預測分析。使用MEGA4.0軟件進行系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建。
　　 [結(jié)果]:
　　

3、布萊凱特肉牛的心臟脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)基因(Genebank登陸號:FJ756345)是由4個外顯子（依次為73bp、173bp、102bp和54bp）和3個內(nèi)含子（3463bp、1892bp和1494bp）組成。其核苷酸編碼序列(CDS)為402bp，編碼133個氨基酸。布萊凱特肉牛與牦牛、普通牛、山羊、豬、馬、人、大鼠、小鼠和雞9個物種之間的同源性大小依次為99.3％、99.0％、96.3％、92.5％、89.8％、88.

4、3％、83.8％、82.8％、75.6％，其氨基酸的同源性為99.2％、99.2％、96.2％、93.2％、91.7％、88.7％、86.5％、86.5％、77.4％。系統(tǒng)發(fā)生樹將這些物種總體上分成2支，雞為獨立的一支，布萊凱特肉牛、牦牛、普通牛、山羊、豬、馬、人、大鼠、小鼠為另一獨立的大分支。
　　 [結(jié)論]:
　　 1.布萊凱特肉牛的心臟脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）基因是由4個外顯子（依次為73bp、173bp、1

5、02bp和54bp）和3個內(nèi)含子(3463bp、1892bp和1494bp)組成。其核苷酸編碼序列(CDS)為402bp，編碼133個氨基酸。
　　 2.布萊凱特肉牛與牦牛心臟脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP）基因全序列比較發(fā)現(xiàn)有41處堿基的變化。并且在內(nèi)含子部分有堿基的插入和缺失，1415、1628、1808、2441和3436各位點后出現(xiàn)了堿基的插入（插入的堿基分別為T、C、A、A和A），852、2444、7043位點出現(xiàn)了堿基

6、的缺失（缺失的堿基分別為A、G、G）。
　　 3.布萊凱特肉牛與牦牛和普通牛相比，在氨基酸序列50位處發(fā)生了氨基酸的變異，布萊凱特肉牛為異亮氨酸，牦牛和普通牛為纈氨酸，這是由其編碼核苷酸序列148處(G→A)產(chǎn)生的，造成了布萊凱特肉牛與牦牛和普通牛在氨基酸水平上的差異。
　　 4.分析10個物種核苷酸和氨基酸的同源性，分別介于75.6％-99.3％和77.4％-99.2％之間，表明H-FABP基因和氨基酸序列保守性較高。