興凱湖翹嘴鲌(Culter alburnus)H-FABP與LPL基因的克隆及表達(dá).pdf

1、翹嘴鲌（Culter alburnus）是中國(guó)名貴的鯉科(Cyprinidae)淡水魚類，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但由于過度捕撈，導(dǎo)致天然資源日益減少，其市場(chǎng)需求日趨緊張，因此，翹嘴鲌具有良好人工養(yǎng)殖前景。魚類的肉質(zhì)風(fēng)味、口感等是影響其受消費(fèi)者歡迎程度的重要因素。目前，從分子水平對(duì)魚類肉質(zhì)進(jìn)行的研究越來(lái)越多，許多魚類肉質(zhì)性狀候選基因被逐漸發(fā)掘出來(lái)，其中脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase，LPL)和脂肪酸結(jié)合蛋白家

2、族(fatty acid binding proteins，F(xiàn)ABPs)已被廣泛研究。
　　 本研究根據(jù)Genbank中已知的鯉科魚類LPL和H-FABP基因序列設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆出翹嘴鲌脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase，LPL)和心型脂肪酸結(jié)合蛋白(Heart FABP)的部分cDNA序列，再利用獲得的序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增出其他部分的cDNA序列，將所得序列進(jìn)行拼接，得到全序

3、列;采用熒光定量PCR(Real-time PCR)技術(shù)檢測(cè)了兩者在興凱湖翹嘴鲌心臟、肝臟、脾、中腎、脂肪、肌肉、性腺及鰓等組織中的表達(dá)量。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.獲得了翹嘴鲌H-FABP基因部分CDS區(qū)，并采用RACE技術(shù)克隆得到該基因的3’端和5’端未知區(qū)域，序列拼接后得到778bp的cDNA序列,其中包括編碼133個(gè)氨基酸和一個(gè)終止密碼子的完全CDS區(qū)序列(402bp)，完整的3'UTR(242bp)區(qū)和5'UTR區(qū)(1

4、34bp)。
　　 2.通過Blast比對(duì)顯示翹嘴鲌H-FABP基因CDS區(qū)與鯉魚（Cyprinus carpio）、齊口裂腹魚(Schizothorax prenanti)的同源性達(dá)91％; H-FABP基因氨基酸同源性比對(duì)顯示與虹鱒的同源性為76％;與斑馬魚的同源性為85％，翹嘴鲌比斑馬魚在462位多兩個(gè)氨基酸，分別為谷氨酰胺(Q)和半胱氨酸(C)。
　　 3.得到翹嘴鲌LPL基因的—部分CDS區(qū)，使用普通PCR分段

5、克隆剩余序列并采用RACE法獲得該基因的5，端和3，端未知區(qū)域，進(jìn)行序列拼接，獲得由編碼502個(gè)氨基酸和—個(gè)起始密碼子的完全CDS區(qū)序列(1524bp)以及5'UTR(159bp)區(qū)和部分的3'UTR區(qū)(423bp)組成的共1947bp的基因組序列，Genbank登錄號(hào)為KC166231。
　　 4.核苷酸同源性比對(duì)顯示翹嘴鲌LPL基因CDS區(qū)與草魚（Ctenopharyngodon）的CDS區(qū)核苷酸同源性達(dá)到98％;草魚（Ct

6、enopharyngodon），鰱(Hypophthalmichthys molitrix)，鳙(Aristichthys nobilis)的同源性達(dá)到97％以上;與鯉(Cyprinus carpio)，斑馬魚(Danio rerio)，鯽(Carassius auratus)等鯉科魚類的同源性為90％。
　　 5.對(duì)翹嘴鲌7個(gè)組織（鰓、心臟、腸、肝臟、肌肉、腎臟、脾臟）進(jìn)行H-FABP和LPL基因表達(dá)分析。Real-time