翹嘴鱖Leptin-b基因結(jié)構(gòu)、進(jìn)化及表達(dá)分析.pdf

1、從本實(shí)驗(yàn)室的翹嘴鱖(Sinipercachuatsi)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中搜索得到Leptin-b基因部分cDNA序列，首先通過NCBI數(shù)據(jù)庫比對初步確定序列的準(zhǔn)確性，然后通過PCR、測序獲得最終準(zhǔn)確的Leptin-b部分核心cDNA序列。根據(jù)該序列，分別設(shè)計(jì)5'和3'RACE引物進(jìn)行RACE擴(kuò)增，得到Leptin-b基因5'和3'末端序列，拼接得到Leptin-b的cDNA序列。應(yīng)用GenomeWalker方法獲得Leptin-b5'側(cè)翼區(qū)

2、序列，然后克隆得到Leptin-b基因內(nèi)含子序列，拼接得到嘴鱖翹Leptin-b基因組DNA序列。
　　Leptin-b基因的cDNA序列全長為698bp，包括471bp的開放讀碼框，編碼157aa的蛋白質(zhì)，5'-untranslatedregion(UTR)長度為130bp，3'-UTR長度為94bp;推導(dǎo)的aa序列含有20個aa殘基的信號肽，兩個半胱氨酸殘基以便用于二硫鍵的形成。Leptin-b基因5'側(cè)翼區(qū)長度為418bp，

3、上游30bp處發(fā)現(xiàn)典型的TATAbox，此外還存在其他調(diào)控元件:CREB(155bp)、AP2(209bp)、AP1(242bp)、GATA(286bp)、C/EBP(305bp和325bp)。
　　基因結(jié)構(gòu)對比分析表明，翹嘴鱖Leptins(Leptin-a和Leptin-b)基因只含有一個內(nèi)含子，通過與其他物種Leptin基因結(jié)構(gòu)的比較發(fā)現(xiàn)，翹嘴鱖Leptins基因的內(nèi)含子在基因內(nèi)所處的位置與其他物種Leptin基因中內(nèi)含子2

4、所處的位置基本一致，表明在翹嘴鱖進(jìn)化過程中，Leptins基因很可能丟失了內(nèi)含子1。蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)預(yù)測表明，其蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)與人Lentin蛋白非常保守，兩個半胱氨酸殘基以便用于二硫鍵的形成，都具有四個螺旋和中間一段連接肽的結(jié)構(gòu)特征。
　　系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明，雖然在魚類Leptin簇中也存在多分枝，但哺乳動物L(fēng)eptin明顯同鯉科魚類Leptin-b聚集成簇，所以鯉科魚類Leptin-b很可能同哺乳類Leptin是直系同源的，同時(shí)

5、，需要更多魚類物種Leptin-b的序列信息來驗(yàn)證。
　　檢測翹嘴鱖和草魚(Ctenopharyngodonidellus)Leptins（Leptin-a和Leptin-b）及其受體(Lepr)基因在各組織中的表達(dá)水平，比較肉食性魚類和草食性魚類中Leptins的表達(dá)模式。翹嘴鱖Leptin-a的主要表達(dá)部位是肝臟，在其他組織中只有少量表達(dá);但在草魚中，Leptin-a在肝臟及腦各組織中的表達(dá)量均較高。在翹嘴鱖中，Leptin-