采用經(jīng)EDC交聯(lián)的纖維蛋白凝膠作為可注射性軟骨細(xì)胞支架材料的研究.pdf

1、目的：軟骨組織是人體內(nèi)重要的支撐結(jié)締組織,但是軟骨缺損的自身修復(fù)能力有限,組織工程技術(shù)為軟骨的修復(fù)重建提供了一個新的發(fā)展方向。纖維蛋白(fibrin)由于其良好的可塑性、粘附性和生物相容性而成為組織工程軟骨的主要支架材料。纖維蛋白凝膠作為軟骨細(xì)胞支架材料存在生物強(qiáng)度差和降解過快的缺點。本實驗擬探索利用碳化二亞胺(EDC)增加纖維蛋白凝膠的交聯(lián)度、提高其生物強(qiáng)度和抗降解能力的可能性,以更好地構(gòu)建可注射性軟骨。
　　 方法：第一部分

2、探索EDC與纖維蛋白原反應(yīng)合成凝膠的實驗條件:利用不同配比的纖維蛋白原和EDC進(jìn)行反應(yīng)制備理想的凝膠樣本,并通過穩(wěn)定性檢測、抗酶解能力檢測、掃描電鏡等分析材料的性能,并與傳統(tǒng)的纖維蛋白凝膠進(jìn)行比較。第二部分探索EDC交聯(lián)的纖維蛋白凝膠作為細(xì)胞支架材料在體外培養(yǎng)中對細(xì)胞生存活力的影響:以EDC和纖維蛋白原進(jìn)行反應(yīng)制備支架材料,與軟骨細(xì)胞混合構(gòu)建組織工程軟骨樣本,對照組為傳統(tǒng)的纖維蛋白凝膠軟骨細(xì)胞樣本。在培養(yǎng)箱中進(jìn)行體外培養(yǎng),觀察十天,在實

3、驗的第1,4,7,10天,利用活細(xì)胞熒光檢測試劑盒檢測樣本中的細(xì)胞存活情況。
　　 結(jié)果：第一部分:EDC和凝血酶同時與纖維蛋白原反應(yīng)不能凝膠化,而用EDC取代凝血酶形成纖蛋白凝膠較傳統(tǒng)的纖維蛋白凝膠有更好的生物強(qiáng)度和抗酶解能力,有著更緊密有序的三維多孔結(jié)構(gòu),且隨著EDC濃度的增加而提高。第二部分:軟骨細(xì)胞在對照組(纖維蛋白原200mg/ml+凝血酶100U/ml)和實驗組(纖維蛋白原200mg/ml+EDC100mg/ml)的

4、支架材料中生長良好。而EDC濃度較高的實驗組軟骨細(xì)胞在一周內(nèi)均死亡。
　　 結(jié)論：適當(dāng)濃度的EDC對纖維蛋白原交聯(lián)形成的纖維蛋白凝膠在生物強(qiáng)度和抗酶解能力方面較傳統(tǒng)的纖維蛋白凝膠有明顯的提高,所形成的三維多孔隙網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)更為緊密有序,且能為細(xì)胞的生長提供足夠的空間,在實驗觀察期內(nèi)軟骨細(xì)胞在該支架材料中存活良好。過高濃度的EDC形成的凝膠塊則不適合細(xì)胞的生長,其原因究竟與凝膠塊中孔隙太小有關(guān),或者與過高濃度的EDC造成對軟骨細(xì)胞的可