硒甲基半胱氨酸對Aβ1-42導致的神經干細胞凋亡的保護及其機制研究.pdf

1、β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)是老年斑(senile plaques,SPs)的主要成分,目前普遍認為Aβ的聚集是阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)發(fā)病的主要原因,大量聚集的Aβ具有神經毒性。近年來研究發(fā)現,作為人體必需微量元素之一的硒具有神經毒性保護作用。鑒于此,本研究通過一系列體外實驗探討了硒甲基半胱氨酸對Aβ1-42導致的神經干細胞(neural stem cells,NSCs)凋亡作用的保護

2、及其保護機理,有助于進一步了解Aβ對神經發(fā)生的作用,為NSCs用于治療AD等神經退行性疾病提供理論依據和實驗數據。
　　 取新生1 d的ICR(institute of cancer researcch,ICR)小鼠大腦,通過機械分離和體外培養(yǎng)獲取NSCs。利用免疫組織化學和RT-PCR方法驗對NSCs進行鑒定。
　　 在體外將1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL的硒甲基半胱氨酸分別作用于NSCs2

3、4 h后,再將聚合后的10μmol/L的Aβ1-42寡聚體加入相應實驗組中作用12 h、24 h和48 h,運用MTT法和流式細胞儀分別檢測細胞增殖和凋亡情況。通過RT-PCR和Western Blot檢測硒甲基半胱氨酸和Aβ1-42寡聚體作用前后NSCs中c-Jun和JNK基因的表達,探尋硒甲基半胱氨酸對Aβ1-42導致的NSCs凋亡的保護機制。
　　 結果顯示,1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL硒甲基半胱氨酸分別單獨

4、作用于NSCs12 h、24 h和48 h,對NSCs增殖無顯著影響;而50μg/mL的硒甲基半胱氨酸作用于NSCs12 h、24 h和48 h,NSCs增殖下降,說明大劑量的硒甲基半胱氨酸對NSCs有損傷作用。在10μmol/L的Aβ1-42和1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL的硒甲基半胱氨酸共作用組中,12 h時,1μg/mL、5μg/mL和50μg/mL硒甲基半胱氨酸對10μmol/L的Aβ1-42導致的凋

5、亡無明顯保護作用,而10μg/mL硒甲基半胱氨酸對10μmol/L的Aβ1-42導致的凋亡具有極顯著保護作用(p＜0.01);24 h時,1μg/mL、5μg/mL和10 gg/mL硒甲基半胱氨酸對10μmol/L的Aβ1-42導致的凋亡均具有極顯著保護作用(p＜0.01),而50μg/mL硒甲基半胱氨酸對10μmol/L的Aβ1-42導致的凋亡無明顯保護作用;48 h時,1μg/mL、5μg/mL和10μg/mL硒甲基半胱氨酸對10μ

6、mol/L的Aβ1-42導致的凋亡均具有顯著保護作用,且5μg/mL和10μg/mL硒甲基半胱氨酸保護作用極顯著(p＜0.01),而50μg/mL硒甲基半胱氨酸對10μmol/L的Aβ1-42導致的凋亡無明顯保護作用。隨后,我們對具有保護作用的三組濃度進行時間上的比較,發(fā)現僅有10μg/mL硒甲基半胱氨酸對10μmol/LAβ1-42導致的凋亡的保護作用,在48 h時與24 h、12 h時具有極其顯著差異(p＜0.01),而其它濃度的硒

7、甲基半胱氨酸對10μmol/LAβ1-42導致的凋亡的保護作用不具有作用時間上的差異。硒甲基半胱氨酸對Aβ1-42導致的NSCs凋亡作用的保護機制中,RT-PCR結果顯示,保護組中,10μmol/LAβ1-42+1μg/mL Se、10μmol/LAβ1-42+5μg/mL Se、10μmol/L Aβ1-42+10μg/mL Se與10μmol/LAβ1-42單獨作用組比較,c-Jun和JNK表達逐漸減弱,而10μmol/L Aβ1-