乙型腦炎病毒對小鼠組織的嗜性及影響的形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、日本乙型腦炎病毒是黃病毒科黃病毒屬的成員之一,具有嗜神經(jīng)性,其引起的日本乙型腦炎是一種嚴(yán)重危害人畜健康的蟲媒病毒性疾病。疫苗接種是控制乙腦的可靠方法。目前對乙腦尚無特異性療法,主要是支持療法和對癥治療。乙腦的致病機理研究對從根本上控制乙腦至關(guān)重要。然而,乙腦的致病機制目前仍不十分清楚。本研究以小鼠為試驗?zāi)Ｐ?研究了乙腦病毒在小鼠體內(nèi)分布及其對腦、脾臟等臟器的組織病理學(xué)影響。本論文主要從以下方面進行了研究:
　　 1.乙腦病毒對小

2、鼠各器官的組織病理學(xué)影響本試驗以SPF級4周齡雌性BALB/c小鼠為試驗動物,用組織病理學(xué)方法檢測乙腦病毒對小鼠各組織器官結(jié)構(gòu)的影響變化。結(jié)果顯示:當(dāng)乙腦病毒感染后,病理變化主要發(fā)生在腦和脾臟。在小鼠腦內(nèi),呈現(xiàn)非化膿性腦炎病變。組織學(xué)表現(xiàn)為神經(jīng)元壞死、血管管套現(xiàn)象、膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)節(jié)。在感染組小鼠脾臟中,白髓面積增加,紅髓面積相對減少,且白髓增加與紅髓減少的改變隨時間呈現(xiàn)一定的規(guī)律。即從感染后的2 d至4 d,脾臟有淤血現(xiàn)象。感染后第6 d,

3、白髓面積輕微增加,紅髓面積相對少量減少。感染后第8 d至10 d,白髓面積明顯增加,且白髓內(nèi)淋巴細(xì)胞明顯增多,紅髓面積相對明顯減少。在感染組小鼠脾臟中還觀察到壞死現(xiàn)象。在正常對照組,小鼠脾臟未見明顯病變。小鼠其他器官如肝臟、胸腺、腎臟、肺臟、皮膚、胃的組織學(xué)結(jié)構(gòu)并未發(fā)現(xiàn)明顯異常。結(jié)果驗證了乙腦病毒的神經(jīng)嗜性,且對其他組織影響較小。脾臟內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的改變表明淋巴細(xì)胞可能在乙腦病毒體內(nèi)外周組織中的游走起到一定作用。
　　 2.乙腦

4、病毒對小鼠腦的IHC與凋亡分析利用IHC法研究了乙腦病毒對小鼠腦的影響。研究結(jié)果表明乙腦病毒P3強毒株對神經(jīng)元有直接侵染作用,引起小鼠腦呈現(xiàn)明顯的神經(jīng)炎癥變化,免疫組織學(xué)具體表現(xiàn)為多數(shù)星形膠質(zhì)細(xì)胞突起拉長、伸展,呈現(xiàn)出抵御乙腦病毒的激活狀態(tài),尤其是海馬部位的星形膠質(zhì)細(xì)胞激活明顯。小膠質(zhì)細(xì)胞突起伸展,也呈現(xiàn)出明顯的抵御乙腦病毒的激活狀態(tài)。這些神經(jīng)炎癥會對神經(jīng)元起到一定的保護作用,然而過度的神經(jīng)炎癥又會進一步促進神經(jīng)元損傷。
　　

5、采用TUNEL凋亡法,對小鼠感染乙腦病毒P3強毒株后的腦內(nèi)凋亡進行了研究。研究發(fā)現(xiàn)腦中血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)較強的標(biāo)記熒光信號,表明腦的血管內(nèi)皮細(xì)胞在乙腦病毒的影響下有明顯的凋亡作用。此結(jié)果對解釋乙腦病毒突破BBB的途徑有一定意義。
　　 3.乙腦病毒對小鼠脾臟的IHC與凋亡分析小鼠頸部皮下接種日本乙型腦炎病毒P3強毒株,并用IHC法CD3+抗體檢測T淋巴細(xì)胞。結(jié)果分析顯示,T淋巴細(xì)胞的數(shù)量在感染后第O d至3 d減少,3 d到7 d

6、增加,7 d到10 d再次顯著性降低。此外,神經(jīng)癥狀出現(xiàn)在感染后6 d。上述結(jié)果提示,細(xì)胞免疫在對抗日本乙型腦炎病毒的第一期病毒血癥中起著至關(guān)重要的作用,而免疫反應(yīng)在第一期病毒血癥期免疫抑制后激活,且神經(jīng)功能障礙在細(xì)胞免疫激活時出現(xiàn)。結(jié)合結(jié)果中T淋巴數(shù)目第7 d至10 d顯著性減少和神經(jīng)癥狀出現(xiàn)在感染后6 d,可以推測T淋巴細(xì)胞在乙腦病毒轉(zhuǎn)移至腦可能發(fā)揮了一定的作用,脾臟T淋巴細(xì)胞在感染后第8 d至10 d顯著減少可能是脾臟T淋巴細(xì)胞受

7、損或轉(zhuǎn)移至血,甚至入腦。乙腦病毒很可能通過T淋巴細(xì)胞進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)并引起神經(jīng)癥狀。T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移至腦發(fā)揮其免疫監(jiān)視作用,對出現(xiàn)神經(jīng)炎癥的小鼠起到保護作用,避免其死亡。然而,如果細(xì)胞免疫不足,進入腦的T淋巴細(xì)胞反而能夠加劇神經(jīng)炎癥,并導(dǎo)致乙腦病毒在T淋巴細(xì)胞中潛藏。感染后神經(jīng)癥狀出現(xiàn)的第六天是第一期病毒血癥過渡至第二期病毒血癥的關(guān)鍵點。一旦乙腦病毒突破BBB,神經(jīng)元開始受到威脅,小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞可能開始防御性激活。巨噬細(xì)胞免疫組

8、織學(xué)結(jié)果中脾臟中巨噬細(xì)胞增加,表明對脾臟內(nèi)壞死的細(xì)胞起到吞噬作用,也提示處于向腦中轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)備階段。本章研究結(jié)果顯示了小鼠日本乙型腦炎病毒感染后特有的免疫病理變化,并進一步豐富了日本乙型腦炎免疫病理機制。
　　 采用TUNEL凋亡法,對小鼠感染乙腦病毒P3強毒株后的脾臟內(nèi)凋亡情況進行了研究。研究發(fā)現(xiàn)脾臟在乙腦病毒的影響下,并沒有產(chǎn)生明顯凋亡。本章研究結(jié)果符合病毒侵入體內(nèi)淋巴細(xì)胞不凋亡,只對其他組織如腦的凋亡起調(diào)節(jié)作用的說法。脾臟中