清胰顆粒對(duì)SAP大鼠部分臟器的保護(hù)作用及AQP-4表達(dá)影響的研究.pdf

1、【研究背景】急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是臨床常見(jiàn)病，我國(guó)以膽源性AP為主，近年來(lái)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，約有25％可發(fā)展為重癥急性胰腺炎(severeacute pancreatitis, SAP)，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚，臨床治療尚無(wú)特效藥。中藥清胰湯應(yīng)用于臨床可明顯改善病人癥狀，縮短病程，減少并發(fā)癥，表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，清胰顆粒（qingyi grains, QYG）為清胰湯的固體劑型，深入探索新劑

2、型QYG對(duì)SAP的療效和作用機(jī)制，有助于深入認(rèn)識(shí)SAP。
　　 【目的】利用SAP大鼠模型，探討QYG 灌胃治療SAP大鼠對(duì)其胰腺和腎臟的療效及其相關(guān)作用機(jī)制，并探討AQP-4在SAP 發(fā)病機(jī)制中的作用以及QYG 治療SAP對(duì)AQP-4表達(dá)的影響，為QYG的進(jìn)一步研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　 【方法】 80只Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分組：假手術(shù)組（sham-operation, SO），SAP組，QYG組

3、，每組24只，正常對(duì)照組8只。逆行胰膽管注射5％?；悄懰徕c（sodiumtaurocholate, STC）（0.1ml/100g)制備SAP大鼠模型。實(shí)驗(yàn)方法：①HE 染色觀察胰腺和腎病理變化；②稱重法測(cè)大鼠腎臟的干濕重比及體重系數(shù)；③比色法測(cè)淀粉酶（amylase，AMS）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）血清水平；④ELISA 測(cè)血清IL-1、I

4、L-6和TNF-a 含量；
　　 ⑤免疫組化和western blot 檢測(cè)胰腺和腎臟組織中AQP-4蛋白表達(dá)情況，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription PCR，RT-PCR）測(cè)AQP-4-mRNA表達(dá)水平。
　　 【結(jié)果】①SAP組大鼠腎臟干濕重比較SO組?。≒<0.05），經(jīng)QYG 治療后，腎臟干濕重比上升，治療72h與相應(yīng)時(shí)間SO組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；②SAP組大鼠腎臟系數(shù)較SO組和Q

5、YG組均小，但三組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；③血清AMS、MDA水平在SAP組和QYG組均明顯高于SO組，予QYG 治療后血清AMS和MDA 明顯降低（P<0.05），24h、48h和72h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)呈逐漸下降趨勢(shì)；SAP組和QYG組血清總SOD 含量均明顯低于SO組，治療后QYG組較SAP組升高，24h內(nèi)升高無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，48h后升高顯著（P<0.05）。④SAP組和QYG組血清炎癥因子(IL-1、IL-6、TNF-α)含量均高于SO組

6、，SAP組升高更明顯，48h 達(dá)到峰值，72h 有所回落，經(jīng)QYG 治療后各指標(biāo)均有下降，QYG 療效呈時(shí)間依賴性，炎癥因子之間呈正相關(guān)性(r=0.984, r=0.972, r=0.966)。⑤SO組胰腺和腎臟均無(wú)明顯病理變化，SAP組出現(xiàn)了不同程度的水腫、滲出以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，部分組織內(nèi)有出血、壞死，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)破壞變模糊，甚至連成片狀，予QYG 治療后病理評(píng)分顯著低于SAP組（P<0.05）。⑥大鼠胰腺組織中未見(jiàn)到有AQP-4 陽(yáng)性

7、表達(dá)細(xì)胞，腎臟組織中有不同程度的AQP-4 陽(yáng)性染色細(xì)胞，其表達(dá)量與SAP大鼠病變嚴(yán)重程度正相關(guān)，QYG 治療后腎臟AQP-4蛋白表達(dá)量較SAP組減少，免疫印跡和RT-PCR 結(jié)果變化趨勢(shì)相近。⑦經(jīng)統(tǒng)計(jì)相關(guān)分析AQP-4與炎癥介質(zhì)呈現(xiàn)正相關(guān)性(r=0.764, r=0.827, r=0.784, P 均<0.05)。⑧QYG 治療SAP 療效具有時(shí)間依賴性。
　　 【結(jié)論】①SAP大鼠血清AMS 明顯升高，結(jié)果提示逆行胰膽管注射

8、STC 誘導(dǎo)大鼠SAP 模型成功，QYG 可降低大鼠血清AMS水平。②QYG對(duì)SAP大鼠胰腺和腎臟病理?yè)p傷具有保護(hù)作用；③QYG 使大鼠血清AMS、MDA水平降低和SOD水平升高，提高機(jī)體抗氧化因子的水平和清除氧自由基的能力，抗氧化作用可能是QYG 治療SAP的機(jī)制之一。④大鼠胰腺和腎臟AQP-4表達(dá)量各不相同，胰腺未見(jiàn)表達(dá)，腎臟有不同程度表達(dá)AQP-4蛋白。⑤SAP大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α水平呈逐漸升高趨勢(shì)，與腎臟AQP