大鼠缺氧缺血性腦損傷血腦屏障改變、AQP-4的表達及姜黃素的影響.pdf

1、目的：檢測大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxie ischemic brain damage，HIBD)后NOS活力的改變，水通道蛋白-4(aquaporin-4，AQP-4)的表達以及血腦屏障超微結(jié)構(gòu)的變化，探討姜黃素對大鼠HIBD后腦水腫的影響。
　　 方法：將健康雄性清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠64只，體重180-220g，隨機等分為假手術(shù)對照組(SH組)、缺氧缺血性腦損傷組(HI組)、姜黃素組(CU組)、

2、溶劑對照組(SC組)等四組，每組據(jù)處死時間點的不同又分24h和48h二個亞組，每亞組8只。SH組分離左側(cè)頸總動脈不結(jié)扎，HI組結(jié)扎左側(cè)頸總動脈后，置于常壓低氧艙中2h。艙內(nèi)充入N2，室溫下使艙內(nèi)O2濃度維持在8％左右。CU組、SC組處理同HI組，只是CU組在頸總動脈結(jié)扎手術(shù)前1h腹腔注射姜黃素40mg/kg，而SC組頸總動脈結(jié)扎手術(shù)前1h腹腔注射等量二甲基亞砜。將大鼠在各時間點急性斷頭處死，分別制備大鼠的大腦石蠟標(biāo)本、電鏡標(biāo)本和活組織冰

3、凍標(biāo)本。將冰凍腦組織制備勻漿，生物化學(xué)檢測一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)活力。光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)扎側(cè)皮質(zhì)及海馬區(qū)的血腦屏障(Blood-brain barrier,BBB)及神經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)變化；免疫組化檢測皮質(zhì)及海馬區(qū)AQP-4的表達；電鏡觀察BBB超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1．生物化學(xué)檢測：SH組各時間NOS活力均低于其他各組水平(P<0．05)，其余三組NOS活力可見不同

4、程度的變化；CU組NOS活力低于HI組相同時間點NOS活力(P<0．05)。SC組與HI組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 2．BBB及神經(jīng)細胞的光學(xué)顯微鏡觀察：SH組腦組織毛細血管周圍間隙輕微增寬，實質(zhì)細胞未見水腫、壞死，血管內(nèi)皮細胞以及毛細血管周圍的星形膠質(zhì)細胞未見異常；皮質(zhì)與海馬各區(qū)錐體細胞排列整齊，邊界清，形態(tài)正常，神經(jīng)細胞數(shù)量未見減少。HI組大腦皮質(zhì)與海馬區(qū)毛細血管周圍間隙增寬明顯，水腫明顯，血管內(nèi)皮細胞腫脹，內(nèi)皮細胞間隙增寬

5、，毛細血管周圍的星形膠質(zhì)細胞腫脹，神經(jīng)細胞數(shù)減少，細胞周圍間隙增寬，與SH組比較顯著差異。CU組與HI組相比腦組織血管周圍間隙輕度增寬，水腫不明顯，大部分細胞邊界清，核形狀規(guī)則，核邊界清。SC組與HI組基本相同。
　　 3．免疫組織化學(xué)檢查(immunohistochemistry，IHC)：AQP-4在SH組的皮質(zhì)區(qū)各時間段吸光度(optical density,OD)值均低于其它各組水平(P<0．05)。其余三組可見AQP-

6、4蛋白不同程度的表達。CU組皮質(zhì)區(qū)AQP-4的OD值明顯低于HI組和SC組(P<0．05)。SC組表達與HI組無明顯區(qū)別。在海馬區(qū)各組各時間點的AQP-4的表達及變化規(guī)律與皮質(zhì)區(qū)相似。
　　 4．電鏡觀察BBB超微結(jié)構(gòu)示：SH組大鼠BBB血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)完整、光滑，內(nèi)皮細胞外基膜連續(xù)，血管內(nèi)皮間連接緊密，星形膠質(zhì)細胞足板無腫脹，周圍腦組織未見病理改變。HI組和SC組大鼠大腦皮質(zhì)毛細血管內(nèi)皮細胞吞飲泡增多，基底膜疏松密度不均，緊密