Fas和FasL在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后的表達(dá)研究.pdf

1、目的：利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)動物模型，觀察缺氧缺血性腦損傷后新生大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)變化、Fas和FasL蛋白的合成，并探討二者間的關(guān)系，為臨床新生兒缺氧缺血性腦病的預(yù)防和治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　 方法：1.制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)動物模型。2.行為能力的檢查：分別于術(shù)

2、前和術(shù)后及缺氧時(shí)觀察每只新生大鼠的行為變化。3.將7日齡Wistar大鼠128只，雌雄不限，體重11～19g，隨機(jī)分為：正常對照組（16只）：不做任何處理；假手術(shù)組（16只）：游離左側(cè)頸總動脈后不結(jié)扎，直接縫合皮下組織及皮膚，不進(jìn)行缺氧處理；缺氧缺血組(HIBD)（96只）：采用阻斷左側(cè)頸總動脈后置于低氧環(huán)境中2小時(shí)，建立缺氧缺血性腦損傷動物模型并對其行為進(jìn)行觀察。HIBD組于6h、12h、24h、48h、72h、7d各處死16只，灌注

3、固定后取腦組織常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色觀察神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)變化，免疫組織化學(xué)染色法（SP法）檢測三組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)Fas及FasL在大腦皮層的神經(jīng)元細(xì)胞中的表達(dá)。采用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集與分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，根據(jù)染色強(qiáng)度測定陽性信號灰度。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1.神經(jīng)系統(tǒng)功能改變：正常對照組及假手術(shù)組無明顯神

4、經(jīng)系統(tǒng)異常改變，HIBD組在缺氧1～5分鐘后均出現(xiàn)激惹、翻身不能、平衡異常、夾尾尖叫甚至抽搐等異常行為改變。2.HE染色：缺氧缺血后6h左側(cè)腦神經(jīng)元細(xì)胞水中及少量局灶性壞死，缺氧缺血后72h左側(cè)腦皮質(zhì)的神經(jīng)元細(xì)胞中可見界限清楚的壞死灶。3.Fas的表達(dá)變化：正常對照組及假手術(shù)組偶可見Fas在大腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞胞漿表達(dá)；HIBD組可見較多的大腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞胞漿Fas表達(dá)陽性細(xì)胞，6h開始升高，24h明顯增多，于72h達(dá)高峰，圖像灰度分析

5、示灰度值組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4.FasL的表達(dá)變化：正常對照組和假手術(shù)組FasL在腦神經(jīng)元細(xì)胞胞漿少量表達(dá)，細(xì)胞核無明顯表達(dá)；HIBD組FasL表達(dá)在腦神經(jīng)元細(xì)胞胞漿6h后開始升高，48h～72h達(dá)高峰，至7天仍可見免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞，圖像灰度分析示灰度值組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。5.Fas和FasL表達(dá)水平的相關(guān)性分析，結(jié)果示缺氧缺血性腦損傷后Fas蛋白表達(dá)水平與FasL蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)系，相關(guān)系數(shù)

6、（r=0.8818）。
　　 結(jié)論：1.在HIBD后6h，F(xiàn)as的合成在腦神經(jīng)元細(xì)胞胞漿開始逐漸增多，于72h達(dá)高峰，隨著其增多FasL蛋白表達(dá)也逐漸增多于72h達(dá)高峰，F(xiàn)as的蛋白表達(dá)先于FasL，且通過直線相關(guān)分析兩者的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，2.初步推斷Fas蛋白的活化可以上調(diào)FasL蛋白的表達(dá)。3.Fas/FasL與腦細(xì)胞凋亡有直接關(guān)系，是HIBD的發(fā)病機(jī)制之一。4.另外在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，我們觀察到腦損傷后隨著時(shí)間的推移，顯示Fa