ASD導管封堵前后細胞因子與NF-kB-JNK信號通路關系探索.pdf

1、目的：
　　探索使用導管封堵術治療先天性心臟病房間隔缺損（ASD）前后，患者體內細胞因子的變化及其可能機制，并通過動物實驗進一步探索引起這種變化的分子機制。
　　方法：
　　本文回顧性分析了2013年9月至2015年12月間在我院接受治療200例先天性心臟病房間隔缺損（ASD）患者病例，作為研究組，所有患者均采用導管封堵術進行治療，在治療前、治療6個月之后和治療12個月之后對患者進行體檢，提取患者血清，采用酶聯(lián)免疫吸附

2、的方法測定血清中TNF-α，IL-6，IL-8， IL-10等細胞因子的含量；另外選取200例正常健康體檢人群作為對照組，檢測其血清中細胞因子的含量。
　　在研究組和對照組中各隨機選取100例樣本，對外周血單核細胞樣本采用免疫細胞化學染色，免疫印跡分析檢測，實時熒光定量PCR檢測等實驗方法進行檢測，探索引起患者體內細胞因子上升的分子機制。
　　采用Hybrid方法建立先天性心臟病的幼豬動物模型，成功構建40個先天性心臟病幼豬

3、模型，將40只構建成功的幼豬隨機分為A、B、C、D四組，每組10只幼豬。并保留10只正常幼豬測定血清細胞因子水平作為空白對照組。A組在模型構建手術后采用導管封堵術進行治療并在6個月內連續(xù)注射生理鹽水作為對照組，B組在模型構建手術后6個月內連續(xù)注射PDTC（NF-kb抑制劑），C組在模型構建手術后6個月內連續(xù)注射SP600125(JNK抑制劑），D組在模型構建手術后6個月內連續(xù)注射PDTC（NF-kb抑制劑）和SP600125(JNK抑制

4、劑），術前和術后6個月后測定幼豬體內細胞因子的變化，探究導管封堵術治療先天性心臟病前后患者體內細胞因子變化的分子機制。
　　結果：
　　本文研究結果顯示，2013年9月至2015年12月間在我院接受治療的研究組200例先心病ASD患者術前較對照組血清中炎性細胞因子TNF-α，IL-6，IL-8含量均有顯著的上升，而抗炎細胞因子 IL-10有顯著的降低；采用導管封堵術治療6個月之后研究組患者血清中炎性細胞因子TNF-α，IL-

5、6，IL-8較術前有顯著的降低，而抗炎細胞因子IL-10較術前有一定的上升；治療12個月之后血清中細胞因子TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10恢復到正常水平。
　　研究組患者術前較對照組外周血單核細胞樣本中 NF-KB信號通路和 JNK信號通路有顯著的激活，術后研究組外周血單個核細胞樣本中NF-KB信號通路和JNK信號通路較對照組沒有明顯的激活。實時熒光定量 PCR檢測結果顯示研究組術前炎性細胞因子TNF-α，IL-6，IL

6、-8的mRNA水平有顯著的上升，抗炎細胞因子IL-10的mRNA水平有顯著的降低；術后細胞因子TNF-α，IL-6， IL-8，IL-10的 mRNA水平恢復至正常水平。免疫組織化學染色結果顯示：研究組患者術前較對照組外周血單個核細胞樣本中 NK-kB的細胞核染色陽性率更高，術后與對照組無明顯差別；研究組患者術前較對照組外周血單核細胞樣本中 p-c-Jun的染色陽性率更高，術后研究組較對照組外周血單核細胞樣本中p-c-Jun的染色陽性率

7、無明顯差別。免疫印跡分析檢測結果顯示，研究組患者術前較對照組外周血單核細胞樣本中 p-c-Jun、p-IkBa、p-P65的蛋白水平均有顯著的上升，而術后研究組較對照組外周血單核細胞樣本中p-c-Jun、p-IkBa、p-P65的蛋白水平無明顯差別。
　　采用Hybrid方法建立先天性心臟病ASD的幼豬動物模型，成功構建40個先天性心臟病ASD幼豬模型，將40只構建成功的幼豬分為A、B、C、D四組。四組幼豬在先心病模型構建后均有炎

8、性細胞因子TNF-α，IL-6，IL-8含量上升，抗炎細胞因子 IL-10水平下降的癥狀。導管封堵術治療組在導管封堵術治療后基本回復至正常水平；PDTC注射組炎性細胞因子 TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10的水平較正常水平有一定的上升；SP600125注射組炎性細胞因子TNF-α，IL-6， IL-8，IL-10的水平較正常水平也有一定的上升；PDTC與SP600125聯(lián)合注射組的炎性細胞因子TNF-α，IL-6，IL-8，IL

9、-10的水平與正常水平相比無明顯差別。
　　結論：
　　我們的研究結果顯示：先天性心臟病 ASD患者體內有一定程度的免疫激活，造成患者體內炎性細胞因子水平上升，抗炎細胞因子水平下降，產生一定的炎癥現(xiàn)象；經過導管封堵術治療后，患者體內的免疫系統(tǒng)逐漸恢復。引發(fā)先天性心臟病ASD患者體內細胞因子變化的可能是通過NF-kB信號通路和JNK信號通路的協(xié)同作用下實現(xiàn)的，單獨一條信號通路可能無法實現(xiàn)對于先心病患者體內細胞因子的調節(jié)。我們的