TGF-β1對病理性瘢痕成纖維細(xì)胞中β-catenin表達(dá)的影響及意義.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　 病理性瘢痕在臨床上分為增生性瘢痕和瘢痕疙瘩兩種類型,是機(jī)體對創(chuàng)傷產(chǎn)生的異常組織反應(yīng)。其臨床表現(xiàn)為突出皮膚表面或呈持續(xù)生長狀態(tài),瘢痕形狀不規(guī)則,高低不平,質(zhì)地堅韌,影響美觀,部分患者還會產(chǎn)生疼痛和瘙癢感,甚至造成瘢痕攣縮導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能障礙,可嚴(yán)重危害人們的身心健康。因此,對病理性瘢痕的預(yù)防及治療成為臨床上亟待解決的課題。長期以來,對其發(fā)病機(jī)制的研究一直是國內(nèi)外許多學(xué)者關(guān)注的重點(diǎn),但其機(jī)制復(fù)雜,不能由任何單一因

2、素來完整解釋。近年來,研究不再局限于單一物質(zhì)的作用,而是將相關(guān)物質(zhì)聯(lián)系起來進(jìn)行整體研究。我們通過研究不同濃度的TGF-β1對β-環(huán)連蛋白(β-catenin)在病理性瘢痕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況變化,探討TGF-β/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在病理性瘢痕形成中的作用機(jī)制及相互關(guān)系,為臨床預(yù)防和治療瘢痕提供細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)水平的理論依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 隨機(jī)選取瘢痕疙瘩患者3

3、例為K組,增生性瘢痕患者3例為H組,同時隨機(jī)選取其他整形美容手術(shù)患者切除的正常皮膚組織3例,作為對照N組。將取下的皮膚標(biāo)本在超凈工作臺上剔成真皮組織小塊,并轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中,使其貼附于底面,再加入培養(yǎng)液,放入37℃、5％CO2溫箱培養(yǎng),每3天左右更換培養(yǎng)液。按2×104/ml的細(xì)胞密度將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,分別以不同濃度的TGF-β1處理細(xì)胞,將爬片取出;經(jīng)固定,水化,0.5％Triton X-100孵育,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶

4、活性,用免疫血清阻斷非特異性抗原后,加抗β-catenin抗體,37℃下孵育60min,滴加生物素化二抗,再滴加ABC復(fù)合物,二者均在37℃下孵育30min,各步驟之間均用緩沖液洗3次。DAB顯色后加入蘇木素復(fù)染,樹膠封片。陰性對照省略第一抗體,用PBS緩沖液代替。顯微鏡下觀察并隨機(jī)計數(shù)5個高倍鏡視野(x200)陽性細(xì)胞數(shù).采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,組間比較采用單因素方差分析和g檢驗(yàn),P＜0.05為有顯著性差異。TGF-β

5、1作用前后三種成纖維細(xì)胞β-catenin陽性表達(dá)改變幅度的比較采用成組資料兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn),P＜0.05為有顯著性差異。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 一、β-catenin在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)和定位
　　 1.β-catenin主要表達(dá)于成纖維細(xì)胞胞漿內(nèi),為棕褐色顆粒樣物質(zhì),呈彌漫性分布,在細(xì)胞核內(nèi)也有發(fā)現(xiàn)。
　　 2.相同TGF-β1處理組的β-catenin在K組與H組成纖維細(xì)胞中的表達(dá)水平大于N組的成

6、纖維細(xì)胞(P＜0.01),在K組與H組成纖維細(xì)胞中相比較其差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05).
　　 二、β-catenin在成纖維細(xì)胞中的動態(tài)表達(dá)
　　 β-cateain在各組中的表達(dá)水平隨TGF-β1濃度變化呈先遞增后遞減趨勢,三者β-catenin表達(dá)變化幅度為K組＜H組＜N組,這種差異在K組與H組成纖維細(xì)胞中無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),而在N組成纖維細(xì)胞與K組及H組成纖維細(xì)胞之間明顯(P＜0.01)。
　

7、　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　 1、β-catenin的過度表達(dá)是病理性瘢痕等纖維化疾病的重要機(jī)制之一,即Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對病理性瘢痕的形成起到重要作用。
　　 2、病理性瘢痕成纖維細(xì)胞中TGF-β1的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用被破壞,導(dǎo)致正反饋環(huán)路持續(xù)放大也是病理性瘢痕等纖維化疾病的重要機(jī)制之一,即TGF-β1的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用對病理性瘢痕的形成起到重要作用。
　　 3、TGF-β/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與Wnt