β-catenin在病理性瘢痕中的表達和意義.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　 病理性瘢痕主要包括瘢痕疙瘩(Keliod，K)和增生性瘢痕(Hypertrophic scar，H)，是真皮及真皮下創(chuàng)傷不正常愈合所引起的，以膠原過度沉積為組織病理學(xué)特征的皮膚外觀形態(tài)改變的統(tǒng)稱。它們的共同特征是過度的瘢痕形成，造成局部外形和功能受損。它們不僅破壞了體表美，同時可伴有疼痛和瘙癢等癥狀，還可能影響相關(guān)組織或器官的生理功能，導(dǎo)致畸形，甚至可以發(fā)生癌變，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。皮膚創(chuàng)傷后病理性瘢痕的形

2、成是整形外科面臨的難題之一，所以，對病理性瘢痕的研究具有重要的臨床意義。病理性瘢痕的治療很大程度上依賴于對其發(fā)病機制的明了，但其發(fā)病機制十分復(fù)雜，國內(nèi)外許多學(xué)者已從皮膚張力、部位、年齡、皮膚色素、感染、異物和遺傳機制等方面對病理性瘢痕的發(fā)病機制進行了一系列的研究，但仍不能用任何單一因素來完整解釋，多種因素的共同作用是學(xué)者們目前普遍接受的觀點。我們通過研究β-環(huán)連蛋白(β-catenin)在病理性瘢痕中的表達情況，探討Wnt/β-cate

3、nin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在病理性瘢痕發(fā)病機制中的作用，為臨床預(yù)防和治療瘢痕提供一定的實驗和理論依據(jù)。
　　 實驗方法：
　　 隨機選取瘢痕疙瘩患者30例為K組，增生性瘢痕患者30例為H組，同時隨機選取其他整形美容手術(shù)患者切除的正常皮膚組織30例作為對照N組。取組織剪成5*5*5mm大小放入EP管中加勻漿緩沖液、組織蛋白裂解液。剪碎、超聲粉碎后離心，取上清液作為樣品。以牛清蛋白(BSA)為標(biāo)準品，用考馬斯亮藍測定法定量蛋白，繪制

4、蛋白定量標(biāo)準曲線，于分光光度計下測定在595nm處的吸收度，計算所提取的蛋白的濃度。每例標(biāo)本取總蛋白100μg，用5％濃縮膠，10％分離膠的SDS-PAGE電泳，電壓為80V半小時，120V半小時，用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡3次。濾紙和硝酸纖維膜在轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡，電壓90V轉(zhuǎn)印2小時，結(jié)束后TTBS洗膜3次。5％(W/V)去脂奶粉室溫搖床封閉2小時。封閉后TTBS洗2次，孵育小鼠的單克隆抗體β-catenin(1：400)，β-actin(1:

5、500)，4℃過夜。TTBS洗三次，每次10分鐘，孵兔抗鼠IgG(1:5000)的二抗，室溫孵育2小時。TTBS洗3次，每次10分鐘。加ECL發(fā)光劑，在1～20分鐘內(nèi)顯影、定影，膠片洗滌干燥后洗像。用Quantity_One軟件測定目的條帶的光密度值(OD值)和面積(S)及β-actin光密度值(od)和面積(s)，以(OD×S)/(od×s)代表β-catenin蛋白的相對表達情況。計算每例標(biāo)本中β-catenin蛋白表達量與β-ac

6、tin蛋白表達量的比值，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，實驗數(shù)據(jù)用x±s表示，β-catenin蛋白在不同組間的比較采用兩樣本均數(shù)的t檢驗和方差分析，以P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 實驗結(jié)果：
　　 β-catenin在病理性瘢痕中的表達水平明顯高于正常皮膚，增生性瘢痕組中β-catenin表達水平較正常皮膚組升高約1.830倍，瘢痕疙瘩組中β-catenin的表達水平較正常皮膚組升高約2.243倍。增生性瘢