質(zhì)粒用于乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)量控制的效果評(píng)價(jià).pdf

1、目的：熒光定量PCR技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高，已被廣泛應(yīng)用于乙型肝炎病毒（HBV）DNA的定量檢測(cè)，在HBV診治及預(yù)后判斷中有重要的應(yīng)用價(jià)值，而嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制措施是其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可信的重要保障。為此，本研究采用基因工程方法，自制了HBV DNA定量PCR檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控品，并對(duì)其在臨床常規(guī)工作中的使用價(jià)值進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。
　　方法：選取GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)中HBV全基因組序列共65條，涵蓋了HBV A-H八個(gè)基因型序列。經(jīng)Clust

2、alX2軟件對(duì)HBV各個(gè)基因型序列進(jìn)行多序列比對(duì)分析后，選擇保守序列S區(qū)設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增得到目的基因片段后將其插入pEASY-T1載體構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒用血清稀釋成107 copies/ml、104 copies/ml兩個(gè)水平室內(nèi)質(zhì)控品，初定靶值后用Excel繪制質(zhì)控圖并觀察精密度，進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控品的評(píng)估。
　　結(jié)果：HBV S區(qū)序列已亞克隆到pEASY-T1載體，測(cè)序結(jié)果與目的片段一致。對(duì)序列進(jìn)行NCBI BLAST特異性分析