表沒食子兒茶素沒食子酸酯對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-1及糖酵解關(guān)鍵酶的影響.pdf

1、炎癥是一種免疫系統(tǒng)為中和病理狀態(tài)的正常生理反應(yīng)，然而，失衡或者過長的炎癥反應(yīng)將導(dǎo)致組織的進(jìn)一步損傷，并且炎癥也與多種慢性疾病的發(fā)展有所聯(lián)系。在炎癥反應(yīng)過程中，參與促炎反應(yīng)的巨噬細(xì)胞是M1型，當(dāng)巨噬細(xì)胞向M1型分化時(shí)，細(xì)胞發(fā)生一系列炎癥反應(yīng)，包括NF-κB等信號(hào)通路的激活、多種促炎因子的分泌（IL-1β等）、ROS產(chǎn)物的生成以及細(xì)胞糖代謝的重編程。M1巨噬細(xì)胞發(fā)生代謝重編程，使得細(xì)胞TCA循環(huán)受抑制，糖氧酵解增強(qiáng)，并成為細(xì)胞能量的主要來源

2、，同時(shí)糖酵解所產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物成為合成炎性因子的物質(zhì)來源之一。
　　EGCG是綠茶中主要的多酚類物質(zhì)，也是其中主要的活性物質(zhì)，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤生成和抗氧化的活性，也具有抑制氧化對(duì)器官損傷的功能。EGCG在細(xì)胞表面表面受體為67 LR，通過67LR，EGCG可作用于細(xì)胞多種生理功能，包括細(xì)胞信號(hào)通路以及促炎因子的分泌等。
　　為探討EGCG對(duì)M1巨噬細(xì)胞葡萄糖攝取和糖酵解的影響，本實(shí)驗(yàn)采用LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞為炎

3、癥模型進(jìn)行研究。細(xì)胞采用小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞系和小鼠骨髓細(xì)胞，并將小鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)為小鼠骨髓細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞(bone marrow derivedmacrophage，BMDM)。實(shí)驗(yàn)選取巨噬細(xì)胞主要的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1(Glucose transporter1，GLUT1)，糖酵解關(guān)鍵酶己糖激酶2(hexokinase2，HK2)、u型-2，6-二磷酸果糖激酶2(u-6-phosphofructo-2-kinase，u-P

4、FK2)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase，Pkm)進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)本課題組之前采用EGCG處理RAW264.7細(xì)胞炎癥相關(guān)研究，采用EGCG預(yù)處理2h，處理濃度為12.5μM，設(shè)立空白對(duì)照組、EGCG預(yù)處理組、LPS處理組和LPS+EGCG處理組，然后再用LPS(100ng/mL)處理24h后取材檢測(cè)。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)GLUT1、HK2、u-PFK2和Pkm的mRNA水平，葡萄糖濃度測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液濃度，酶活測(cè)定檢測(cè)HK