表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞端粒酶活性的影響。.pdf

1、【背景】
　　鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是頭頸部常見(jiàn)惡性腫瘤，臨床上以放療和化療為主要治療手段，雖然隨著調(diào)強(qiáng)放療技術(shù)發(fā)展，鼻咽患者治愈率提高及副反應(yīng)減少，但是晚期患者五年生存率仍不理想，且放療后仍有不可忽視的毒性反應(yīng)。而且容易產(chǎn)生多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）現(xiàn)象。目前，尋找出高效、不良反應(yīng)小的新一代抗腫瘤藥物已是當(dāng)務(wù)之急。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）是

2、綠茶多酚的主要成份，從綠茶中提練出來(lái)的一種高效低毒的天然化合物，同時(shí)兼有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)雙重作用，因此研究EGCG抗鼻咽癌的藥理作用機(jī)制，具有重大的理論及實(shí)踐意義，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
　　隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)EGCG研究的深入，其抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡已達(dá)到共識(shí)[1-3]。但其具體機(jī)制不是明確。端粒酶是一種具有逆轉(zhuǎn)錄活性的DNA聚合酶，它與細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān)。大部分人類(lèi)體細(xì)胞無(wú)或低端粒酶活性，故其分裂次數(shù)有限，最終細(xì)胞走向衰老

3、與凋亡。相反，少部分增殖活躍人類(lèi)體細(xì)胞、生殖細(xì)胞與大部分腫瘤細(xì)胞（約占90％）其端粒酶活化，端粒不因復(fù)制而縮短，細(xì)胞走向永生化。端粒酶包含具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的逆轉(zhuǎn)錄蛋白（human telomerase reverse transcriptase protein，hTERT）和端粒酶RNA（TERC/TR）。hTERT是端粒酶的催化亞基，也是端粒酶激活的關(guān)鍵限速因子。本文將從細(xì)胞分子水平探討 EGCG對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的端粒酶hTER

4、T及其基因表達(dá)的影響，為探討廣譜天然綠茶多酚EGCG在體內(nèi)、外的抗鼻咽癌機(jī)制，為EGCG的新藥開(kāi)發(fā)提供理論和科研依據(jù)。
　　【目的】
　　通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，探討廣譜天然綠茶多酚EGCG在體外鼻咽癌CNE2細(xì)胞的抗鼻咽癌機(jī)制，為EGCG的新藥開(kāi)發(fā)提供理論和科研依據(jù)。
　　【方法】
　　1.通CCK-8試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株的增殖抑制作用。
　　2.通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EGCG

5、對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株周期及凋亡的影響。
　　3.利用RT-PCR實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株hTERT mRNA表達(dá)的影響。
　　4.利用Western blot實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株hTERT蛋白及c-Myc蛋白表達(dá)的影響。
　　【結(jié)果】
　　1. EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株的增殖具有明顯抑制作用，且呈現(xiàn)時(shí)間及藥物濃度依賴(lài)性。
　　2. EGCG具有阻滯鼻咽癌CNE2細(xì)

6、胞周期進(jìn)展作用，使G0/G1期比例升高（P<0.001），S期比例下降（P<0.002）。低濃度組（100ug/mL）細(xì)胞周期阻滯呈時(shí)間依賴(lài)性，隨著濃度增大及作用時(shí)間廷長(zhǎng)細(xì)胞周期阻滯時(shí)間依賴(lài)性不明顯，但細(xì)胞凋亡率升高。
　　3. EGCG具有促鼻咽癌CNE2細(xì)胞凋亡作用，隨著作用時(shí)間廷長(zhǎng)其凋亡率升高（P<0.001）,呈時(shí)間依賴(lài)性。
　　4. EGCG具有下調(diào)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株hTERT mRNA（P<0.001）及其蛋白