實(shí)驗(yàn)性房顫兔心房不同部位自主神經(jīng)重構(gòu)的差異性研究及他汀干預(yù)的影響.pdf

1、心房顫動(dòng)（簡(jiǎn)稱房顫，atrial fibrillation，AF）是由于心房無(wú)序的顫動(dòng)造成的嚴(yán)重的心房電活動(dòng)紊亂，是目前臨床工作中最常見的心律失常之一。房顫使得心房失去了有效的收縮與舒張，加之房室結(jié)對(duì)快速心房激動(dòng)的遞減傳導(dǎo)引起的紊亂的心室率導(dǎo)致患者常出現(xiàn)胸悶、心悸等臨床癥狀。房顫患者的主要病理生理特點(diǎn)為心室律（率）紊亂、心功能受損和心房附壁血栓形成，而栓塞、心力衰竭等并發(fā)癥導(dǎo)致房顫患者的致殘率和致死率大大增加，醫(yī)療花費(fèi)也大大增加。迄今為

2、止，房顫治療效果依然不盡人意。藥物治療是房顫治療的基石，射頻消融術(shù)近年來(lái)隨著其技術(shù)水平的提高，消融成功率也逐漸增高。然而，房顫治療的長(zhǎng)期有效性卻由于傳統(tǒng)抗心律失常藥物的潛在副作用和射頻消融術(shù)的高復(fù)發(fā)率特別是長(zhǎng)期復(fù)發(fā)率偏高而備受限制，這與房顫發(fā)生的確切機(jī)制尚未完全闡明密切相關(guān)，也大大增加了房顫治療的難度。房顫的發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，房顫可導(dǎo)致心房電學(xué)和組織學(xué)特性發(fā)生改變，形成心房重構(gòu)，包括早期的電重構(gòu)和較晚期的結(jié)構(gòu)重構(gòu)，兩者隨著房顫進(jìn)程而進(jìn)展

3、，互相影響又相互促進(jìn)。近年研究表明，心臟自主神經(jīng)系統(tǒng)(autonomic nervous system，ANS)是房顫的發(fā)生與維持中的重要環(huán)節(jié)，ANS包括外在ANS與內(nèi)在ANS。越來(lái)越多的研究顯示，心臟內(nèi)在ANS的神經(jīng)元及其神經(jīng)纖維的過(guò)度再生及不均一分布即心臟內(nèi)在自主神經(jīng)重構(gòu)(autonomic neuralremodeling，ANR)，參與了房顫的發(fā)生與維持，是房顫的重要發(fā)病機(jī)制。而且神經(jīng)重構(gòu)常常與電重構(gòu)及結(jié)構(gòu)重構(gòu)并存，彼此相互促進(jìn)

4、，形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致AF的發(fā)生并持續(xù)下去。
　　房顫發(fā)生后，心房的自主神經(jīng)重構(gòu)隨即產(chǎn)生。研究表明，包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)重構(gòu)在內(nèi)的自主神經(jīng)重構(gòu)在房顫維持和易損基質(zhì)的形成過(guò)程中起著重要作用。而對(duì)于房顫發(fā)生后心房自主神經(jīng)重構(gòu)的部位而言，目前關(guān)于房顫后心房神經(jīng)重構(gòu)的研究大多集中在左右心房的神經(jīng)重構(gòu)，而很少涉及房間隔。由于房間隔的兩側(cè)而為心內(nèi)膜，中間又夾有結(jié)締組織及肌束，其中位于房間隔下部右心房面的卵圓窩處主要由結(jié)締組織構(gòu)成，因此房間隔

5、是極度不均一的特殊組織結(jié)構(gòu)，其在房顫的發(fā)生中是否發(fā)生了神經(jīng)重構(gòu)，其與心房其他部位的神經(jīng)重構(gòu)程度是否存在差異性以及其在房顫發(fā)生中所起的作用尚不明確。
　　他汀類藥物作為目前廣泛應(yīng)用的調(diào)脂藥物，具有抗炎、改善內(nèi)皮功能、減輕心肌缺血再灌注損傷等多種不同作用，而近期他汀類藥物對(duì)心律失常的防治作用已成為研究的熱點(diǎn)，特別是其對(duì)房顫等房性心律失常的防治作用受到廣泛關(guān)注，近期研究結(jié)果表明他汀類藥物對(duì)心臟外科圍手術(shù)期房顫具有顯著的預(yù)防作用，但其作用

6、機(jī)制仍不明確。他汀類藥物是否能夠改善或者逆轉(zhuǎn)房顫的自主神經(jīng)重構(gòu)，這種改善或逆轉(zhuǎn)的程度是否存在心房不同部位的差異性，以及其對(duì)房顫發(fā)生的抑制作用如何，目前尚無(wú)報(bào)道。據(jù)此，本研究應(yīng)用心房快速起搏兔制作房顫模型，觀察房顫兔模型心房各部位自主神經(jīng)重構(gòu)的特點(diǎn)及有無(wú)差異性，同時(shí)應(yīng)用瑞舒伐他汀進(jìn)行藥物干預(yù)，觀察他汀類藥物對(duì)于房顫兔模型中心房各不同部位的自主神經(jīng)重構(gòu)的影響，并探討其在房顫中的作用機(jī)制及療效，為房顫治療提供新的干預(yù)靶點(diǎn)，也為臨床上他汀類藥物

7、防治房顫提供新的依據(jù)。
　　目的：
　　本研究應(yīng)用心房快速起搏兔制作房顫模型，觀察房顫兔模型心房各部位自主神經(jīng)重構(gòu)、心房不同部位的自主神經(jīng)重構(gòu)有無(wú)差異性與房顫誘發(fā)率的變化以及瑞舒伐他汀鈣對(duì)心房各部位自主神經(jīng)重構(gòu)的影響，試圖探討瑞舒伐他汀鈣對(duì)房顫治療的可能機(jī)制，為房顫治療提供新的干預(yù)靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1.房顫兔模型的制作及實(shí)驗(yàn)分組
　　1.1 實(shí)驗(yàn)分組
　　將健康新西蘭大白兔30只隨機(jī)分為對(duì)照組(

8、C，n=10)、快速起搏組(P，n=10)、瑞舒伐他汀鈣干預(yù)組(R，n=10)共三組。
　　(1)對(duì)照組（C組）植入起搏器但不打開起搏器開關(guān)，喂養(yǎng)2周。
　　(2)快速起搏組（P組）植入動(dòng)物起搏器以600次/分快速起搏2周。
　　(3)瑞舒伐他汀鈣干預(yù)組（R組）以同樣的方法起搏兩周，同時(shí)術(shù)后給予瑞舒伐他汀鈣(5mg/kg/d)灌胃2周，其余兩組以安慰劑生理鹽水灌胃2周。
　　1.2 房顫兔模型制作
　　利用

9、快速右心房起搏的方法制備房顫兔的動(dòng)物模型。新西蘭大白兔以3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈麻醉后，頸部切開皮膚找到頸靜脈，從頸靜脈植入動(dòng)物起搏器，起搏器電極經(jīng)心內(nèi)電生理儀標(biāo)測(cè)至高位右房，在X線透視下固定電極，然后分離頸部皮膚制作囊袋，將起搏器放入囊袋中，慶大霉素沖洗囊袋，縫合皮膚，整個(gè)過(guò)程遵循無(wú)菌操作，術(shù)后青霉素抗感染3天。
　　2.術(shù)前、術(shù)后心內(nèi)電生理指標(biāo)的測(cè)定
　　術(shù)前經(jīng)頸靜脈植入標(biāo)測(cè)電極，連接電生理儀，以S1Sl

10、200ms，S1S2起始周長(zhǎng)150ms，步長(zhǎng)為-5ms，電壓4V，測(cè)定心房的有效不應(yīng)期(AERP)并以S1S1刺激觀察房顫誘發(fā)率，術(shù)后2周再次測(cè)定AERP和房顫誘發(fā)率。術(shù)中應(yīng)用多導(dǎo)電生理儀LEAD-7000持續(xù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電監(jiān)測(cè)和血壓監(jiān)測(cè)。
　　3.心電圖檢測(cè)
　　術(shù)前所有動(dòng)物均應(yīng)用心臟電生理儀檢測(cè)心電圖，術(shù)后每天進(jìn)行體表心電圖檢查以確定有無(wú)房顫發(fā)生（檢查時(shí)關(guān)閉起搏器開關(guān)），房顫發(fā)生以心電圖出現(xiàn)至少持續(xù)30s以上的頻率快

11、、形態(tài)多變不規(guī)則的房顫波形為標(biāo)準(zhǔn)。
　　4.免疫印記(Western-blot)測(cè)定
　　由于膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（choline acetyl transferase，CHAT）代表心臟中膽堿能神經(jīng)的分布及其活性;絡(luò)氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性可代表心臟中交感神經(jīng)的分布情況。2周后取左右心房及房間隔組織并以酪氨酸羥化酶(TH)及乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(CHAT)分別標(biāo)記交感與副交感神經(jīng)，應(yīng)用Western-bot檢測(cè)各組心肌組織標(biāo)本中CHAT

12、、TH蛋白表達(dá)情況，即獲得心臟中膽堿能神經(jīng)和交感神經(jīng)的含量，從而明確各組動(dòng)物心臟自主神經(jīng)分布及含量。
　　5.免疫組化測(cè)定
　　通過(guò)免疫組化方法和Western-blotting對(duì)CHAT、TH陽(yáng)性神經(jīng)進(jìn)行染色。測(cè)定交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)形態(tài)、密度及分布，并使用計(jì)算機(jī)輔助形態(tài)計(jì)量分析系統(tǒng)(Image-Pro Plus6.0)在高倍鏡下進(jìn)行神經(jīng)密度分析和測(cè)量。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

13、學(xué)分析，計(jì)量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn)，多組間多部位比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，各組間房顫誘發(fā)率的比較采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P值為雙側(cè)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.心內(nèi)電生理指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果
　　起搏兩周后，與C組比較，P組AERP縮短，且P組的房顫房顫誘發(fā)率顯著增加(P＜0.05)，而R組AERP與房顫誘發(fā)率較C組比較無(wú)明顯差異(P

14、＞0.05)，但較P組AERP延長(zhǎng)，房顫誘發(fā)率下降(P＜0.05)。
　　2.心電圖檢測(cè)結(jié)果
　　應(yīng)用多導(dǎo)電生理儀進(jìn)行房顫誘發(fā)率檢測(cè)及每日復(fù)查體表心電圖發(fā)現(xiàn)，C組無(wú)自發(fā)性房顫或其他房性心律失常發(fā)生，P組所有接受右心房快速起搏兔中共有8只出現(xiàn)房顫，成功建立房顫模型。而R組經(jīng)過(guò)2周瑞舒伐他汀鈣干預(yù)后，僅1只兔子發(fā)生房顫(P＜0.01)。
　　3.免疫印記(Western-blot)測(cè)定結(jié)果
　　蛋白質(zhì)印跡法(West

15、ern blotting)顯示，與C組相比，P組左右心房和房間隔的TH和CHAT蛋白表達(dá)量均明顯增加(P＜0.05)，在起搏兩周后P組左房、房間隔和右心房的TH和CHAT蛋白表達(dá)量均較C組升高2-4倍(P＜0.05)。而R組經(jīng)過(guò)兩周的瑞舒伐他汀鈣藥物干預(yù)后，左房、房間隔和右房的交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的蛋白表達(dá)量雖仍高于C組，但較P組明顯下降(P＜0.05)。
　　4.免疫組化測(cè)定結(jié)果
　　免疫組化染色顯示C組左心房、房間隔和右

16、心房組織中TH與CHAT陽(yáng)性的神經(jīng)纖維密度無(wú)明顯差異，但房間隔神經(jīng)分布的不均一程度最大(P＜0.05);P組中左右心房和房間隔的TH與CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度均顯著高于C組，神經(jīng)分布不均一程度顯著增加(P＜0.05)，其中右心房＞房間隔＞左心房;而R組中TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度雖仍高于C組，但與P組相比則明顯下降，神經(jīng)分布不均一程度也降低(P＜0.05)，其中右心房和房間隔的神經(jīng)密度下降更明顯，大于左心房(P＜0.05)。