蜂王漿蛋白質(zhì)、多肽生物活性及儲藏過程中品質(zhì)變化研究.pdf

1、蜂王漿作為一種珍貴的保健食品已經(jīng)有干百年的歷史了,其對人體的各種生物活性與含有的功能性成分是近年來的研究熱點(diǎn)。本研究檢測了蜂王漿的物理、化學(xué)特性、儲藏穩(wěn)定性和抗氧化活性,初步研究了它對脂肪酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,優(yōu)化了蜂王漿蛋白質(zhì)酶解法制備活性多肽的條件并對活性組分進(jìn)行純化以提高活性。
　　 本論文采用杭州保靈養(yǎng)泰禾提供的蜂王漿,在4℃、25℃、37℃下各保存30天,發(fā)現(xiàn)樣品的水溶性蛋白質(zhì)含量、氨基酸含量、多肽含量、水分含

2、量等逐漸下降,而水解度、脂肪氧化程度、酸度逐漸提高,酸敗程度逐漸增加,顏色變暗;通過對脂類物質(zhì)的GC-MC分析,檢測出24種脂類成分;通過SDS-PAGE電泳分析,發(fā)現(xiàn)儲藏溫度越高,蜂王漿水溶性蛋白質(zhì)降解就越明顯。這些理化指標(biāo)隨溫度和時間的變化較敏感,可作為品質(zhì)評價的參考,也說明了蜂王漿儲藏穩(wěn)定性較差,可能是引起活性變化的原因。
　　 通過對蜂王漿生物活性的分析,發(fā)現(xiàn)蜂王漿蛋白質(zhì)提取液有較高的抗氧化活性,并首次發(fā)現(xiàn)蜂王漿具有較高

3、的脂肪酶抑制活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。蜂王漿蛋白質(zhì)對DPPH自由基的清除率最高能達(dá)到60％以上;對鄰苯三酚自氧化的抑制率最高能達(dá)到91.89％;對脂質(zhì)體過氧化的抑制率最高能達(dá)到60.10％;其抗氧化活性隨著儲藏時間逐漸下降,儲藏溫度越高,活性下降越快。蜂王漿蛋白質(zhì)對脂肪酶的抑制率最高能達(dá)到76.59％,對脂肪酶的抑制常數(shù)ki為5.53×10-2mg/mL,抑制類型為競爭性抑制,抑制活性隨著儲藏溫度和儲藏時間的增加而下降:對α-葡萄糖

4、苷酶的抑制活性最高達(dá)到66.23％,抑制常數(shù)ki為11.74 mg/mL,抑制類型為混合競爭性抑制。
　　 本實(shí)驗(yàn)用單因素試驗(yàn)和Box-Bohnken中心組合設(shè)計(jì)試驗(yàn),優(yōu)化了蜂王漿蛋白質(zhì)酶解制備活性多肽的工藝參數(shù),選擇胃蛋白酶為作用酶,蛋白質(zhì)提取料液比1:50,酶解時間5.7 h,初始pH2.3,酶用量21mg/mL,酶解溫度35℃,在此條件下,多肽濃度達(dá)到1.65 mg/mL,且抗氧化活性、對脂肪酶的抑制活性和對α-葡萄糖苷酶

5、的抑制活性都明顯提高,說明酶解處理提高了蜂王漿的利用價值。
　　 蜂王漿蛋白質(zhì)在三種酶解方式作用下的產(chǎn)物:PPs(胃蛋白酶酶解)、TPs(胰蛋白酶酶解)、PTPs(胃蛋白酶和胰蛋白酶復(fù)合酶解)。其中對DPPH自由基的清除活性最強(qiáng)的是PTPs,樣品的水解度最高,氨基酸產(chǎn)率也最高;而對于超氧陰離子的清除活性及對脂肪酶、α-葡萄糖苷酶的抑制活性來說最強(qiáng)的是PPs,樣品的多肽含量最高;從各分子量范圍的酶解產(chǎn)物來看,PPs中小于650 D