CuSO4L51抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)及其機(jī)制研究.pdf

1、CuSO4L51是由鄭州大學(xué)化學(xué)系研制的具有一定的抗腫瘤活性的納米材料,能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),但作用機(jī)制尚不清楚。本文采用體外方法對(duì)CuSO4K51的抗腫瘤活性進(jìn)行篩選,研究CuSO4L51對(duì)敏感細(xì)胞株人胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋亡效果,并探討其作用機(jī)制。
　　 1.CuSO4L51體外抗腫瘤作用
　　 人宮頸癌Hela細(xì)胞,人胃癌SGC-7901細(xì)胞,人食管癌EC9706細(xì)胞,人肝癌SMMC-77

2、21細(xì)胞,人前列腺癌PC-3細(xì)胞,分別經(jīng)0,3.125,6.25,12.5,25,50,100mg/L的CHSO4L51處理24,48和72h后,MTT法檢測(cè)CuSO4L51對(duì)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率,計(jì)算IC50值,將其結(jié)果進(jìn)行比較,選擇對(duì)CuSO4L51比較敏感的細(xì)胞株進(jìn)行研究。結(jié)果顯示,0-100mg/L的CuSO4L51可不同程度的抑制Hela,SGC-7901,EC9706,SMMC-7721,PC-3細(xì)胞的生長(zhǎng),并具有一定的時(shí)間

3、依賴性和濃度依賴性。藥物作用72h后,SGC-7901細(xì)胞的IC50值最小,達(dá)到20mg/L左右,說(shuō)明SGC-7901細(xì)胞對(duì)CuSO4L51最敏感,可以作為進(jìn)一步研究的對(duì)象。人胃癌SGC-7901細(xì)胞分別經(jīng)0,12.5,25,50 mg/L的CuSO4L51處理24,48和72h后,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞輪廓增強(qiáng),反差增大,變圓浮起,細(xì)胞間接觸變松,增殖減慢,胞質(zhì)中顆粒增多。掃描電鏡觀察細(xì)胞

4、表面,發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞微絨毛消失,胞質(zhì)收縮,細(xì)胞呈球形,凋亡細(xì)胞形成膜包裹的凋亡小體凸出于細(xì)胞表面。人胃癌SGC-7901細(xì)胞分別經(jīng)0,12.5,25,50 mg/L的CuSO4L51處理24h和48h后,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的變化,結(jié)果顯示,細(xì)胞周期被阻滯在了G0/G1期,隨著藥物濃度的增加,G0/G1細(xì)胞明顯增多,S期細(xì)胞明顯減少,G2/M期細(xì)胞數(shù)目基本不變。人胃癌SGC-7901細(xì)胞分別經(jīng)0,12.5,25,50 m

5、g/L的CuSO4L51處理72h后,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示:藥物作用72h后,細(xì)胞早期凋亡比例分別為2.97％,4.05%,4.72%和7.17%。熒光顯微鏡下觀察,可以看到隨著藥物濃度的增加,發(fā)出藍(lán)色熒光的早期凋亡細(xì)胞明顯增多。表明CuSO4L51可抑制SGC-7901細(xì)胞的生長(zhǎng),將SGC-7901細(xì)胞阻滯于G0/G1期,并誘導(dǎo)其凋亡。
　　 2.Western-blot法檢測(cè)CuSO

6、4L51對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞周期,凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Western Blot分析CuSO4L51作用后幾種蛋白的表達(dá)情況,以檢測(cè)Caspase-3,Caslaase-9,Bcl-2,Bax,P53,NF-κ B和pCNA等蛋白水平的表達(dá)。0,12.5,25,50mg/L的CuSO4L51處理SCGC-7901細(xì)胞24h后,Caspase-3,Caspase-9,P53,NF-κ B蛋白的表達(dá)被上調(diào),PCNA,Bcl-2/Ba

7、x蛋白的表達(dá)水平被下調(diào)。結(jié)果表明,CuSO4L51可能是通過(guò)上調(diào)Caspase-3,Caspase-9,P53,NF-κB蛋白,下調(diào)PCNA,Bcl-2/Bax蛋白而阻滯細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生。
　　 3.CuSO4L51對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞Caspase-3,Caspase-9基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響
　　 提取CuSO4L51處理前后的人胃癌SGC-7901細(xì)胞總RNA,PCR法檢測(cè)細(xì)胞中Caspase-3,

8、Caspase-9細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)情況。結(jié)果顯示,12.5,25,50mg/L的CuSO4L51處理人胃癌SGC-7901細(xì)胞24h后,Caspase-3,Caspase-9mRNA表達(dá)水平均被上調(diào),不同濃度的CuSO4L51上調(diào)Caspase-3,Caspase-9mRNA的能力有所不同,表明CuSO4L51可影響細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase-3和Caspase-9的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。CuSO4L51可能通過(guò)上調(diào)Caspase-