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文檔簡介
1、目的：分離、培養(yǎng)和鑒定犬骨髓來源的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitorcells，EPCs)，并觀察其在實(shí)驗(yàn)犬體內(nèi)構(gòu)建組織工程骨時(shí)對其血管化和成骨能力的影響。
方法：抽取實(shí)驗(yàn)犬骨髓，密度梯度離心法獲取單個(gè)核細(xì)胞，通過不同培養(yǎng)方法獲得EPCs和經(jīng)成骨誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)，對EPCs進(jìn)行觀察并采用乙?；兔芏戎鞍?Dil-ac-LDL
2、)、荊豆凝集素(FITC-UEA-I)熒光雙標(biāo)、流式細(xì)胞儀鑒定；制備犬同種異體脫鈣骨基質(zhì)(demineralized bone matrix，DBM)，于體外復(fù)合EPCs和經(jīng)成骨誘導(dǎo)的BMSCs，將復(fù)合體植入實(shí)驗(yàn)犬背闊肌筋膜下，影像學(xué)和組織學(xué)方法觀察術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)組織工程骨的血管化和骨形成程度。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行配對t檢驗(yàn)。
結(jié)果：EPCs原代呈集落生長，培養(yǎng)至12天細(xì)胞出現(xiàn)“血管樣”生長并由長梭形變?yōu)?/p>
3、典型的“鋪路石”樣，Dil-ac-LDL、FITC-UEA-I熒光雙染色呈陽性、流式細(xì)胞術(shù)示細(xì)胞CD34和CD133呈陽性。動物實(shí)驗(yàn)術(shù)后4、8、12周，X線顯示實(shí)驗(yàn)側(cè)的骨密度值明顯高于對照側(cè)，兩組標(biāo)本之間骨密度值之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；組織學(xué)觀察顯示實(shí)驗(yàn)側(cè)成骨和血管化均多于對照側(cè)，兩組新生骨面積及血管面積之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論：采用密度梯度離心與貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)的犬骨髓來源的單個(gè)核細(xì)
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