桑椹抗酒精性肝損傷藥效作用及其物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、桑椹為?？粕偕洌∕orus alba L.）的成熟果穗，不僅滋甘味美，而且富含多種營養(yǎng)成分，是首批入選國家衛(wèi)生部“藥食同源”名錄的品種。中醫(yī)認(rèn)為桑椹具有滋陰養(yǎng)血、鎮(zhèn)靜安神、補(bǔ)肝益腎、養(yǎng)顏益智、烏發(fā)明目、延年祛斑、降壓消渴等諸多功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實，桑椹具有促進(jìn)造血細(xì)胞生長，防止血管硬化，調(diào)節(jié)血糖和血脂，抗誘變，抗病毒，抗氧化，抗衰老等諸多藥理作用。
　　此外，還有少量文獻(xiàn)報道了桑椹對酒精/四氯化碳所致的肝損傷有潛在的保護(hù)作用

2、；本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn)桑椹具有激活乙醇脫氫酶（ADH）的活性，顯示其具有潛在的解酒護(hù)肝作用，值得深入研究。近年來，酒精性肝損傷的發(fā)病率和致死率迅速增加，嚴(yán)重威脅著人們生命健康，急需解酒護(hù)肝藥物。但是，桑椹是否真正具有解酒護(hù)肝功效，藥效怎樣，其藥效物質(zhì)是什么等相關(guān)問題尚不清楚。為解決這一系列問題，本論文擬從桑椹抗酒精性肝損傷的藥效學(xué)評價和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)方面著手，對桑椹進(jìn)行深入研究，為其產(chǎn)業(yè)化、綜合利用及價值提升提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支撐。

3、　　圍繞上述科研目標(biāo)，本論文從以下幾個方面展開了桑椹的藥效學(xué)及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。首先，基于ADH激活作用，從分子水平對桑椹的不同極性部位提取物進(jìn)行了活性篩選研究，確定了桑椹多糖（FMPS）具有突出的激活A(yù)DH活性；其次，在活性部位篩選的基礎(chǔ)上，通過分離、純化制備了FMPS，并以此開展了其體外/體內(nèi)抗酒精性肝損傷的效果評價研究，從分子學(xué)和整體動物模型的層面證實了其抗酒精性肝損傷作用；再次，在藥效學(xué)評價的基礎(chǔ)上，對桑椹多糖進(jìn)行了初步表征，為

4、研究“構(gòu)-效”關(guān)系奠定了基礎(chǔ)；最后，對桑椹中 FMPS的提取工藝進(jìn)行了全面研究，為其工業(yè)化大生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。具體結(jié)果如下：
　　一、基于ADH激活作用的桑椹活性部位篩選研究
　　本研究以ADH活性為指標(biāo)，建立了精確靈敏、高效快捷、操作簡便的體外ADH活性評價模型；并采用所建模型對桑椹鮮果的活性部位進(jìn)行深入探索。經(jīng)統(tǒng)計分析顯示，桑椹鮮果的三種不同提取物（乙醇、甲醇和水提取物）對ADH的激活率分別為89.34±2.26％（n

5、=6，RSD=2.54%）、59.56±1.06%（n=6，RSD=1.79%）和135.45±2.96%（n=6，RSD=2.19%），具有顯著性差異。因此，選擇桑椹水提取物作為抗酒精性肝損傷的活性部位。
　　在上述桑椹活性部位篩選研究的基礎(chǔ)上，將桑椹水提物進(jìn)行脫脂、脫色、除蛋白等純化處理，得到中性糖含量為67.96±2.46%的FMPS；同等質(zhì)量濃度下，該FMPS對ADH的激活率明顯大于桑椹水提物；并且在25.24μg·mL-

6、1~176.68μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)對ADH激活率有明顯量效關(guān)系。
　　二、基于整體動物模型試驗的桑椹抗酒精性肝損傷作用研究
　　通過建立小鼠急性、亞急性酒精性肝損傷模型，開展FMPS抗酒精性肝損傷作用的研究。結(jié)果如下：
　　急性酒精性肝損傷模型中FMPS各劑量組均對乙醇所致的血清ALT、AST和肝臟MDA的升高起抑制作用，其中高劑量組的作用效果極為顯著，較之模型組分別降低31.71%、40.90%和30.10%

7、；相反，F(xiàn)MPS各劑量組均能對抗乙醇所致的肝臟組織中GSH、SOD和GSH-Px的降低，其中高劑量組的作用效果極為顯著，較之模型組分別提高了73.22%、40.90%和20.23%。
　　亞急性酒精性肝損傷模型中FMPS各劑量組均對乙醇所致的血清ALT、AST和肝臟MDA的升高起抑制作用，其中高劑量組的作用效果極為顯著，較之模型組分別降低45.23%、54.38%和22.22%；相反，F(xiàn)MPS各劑量組均能對抗乙醇所致的肝臟組織中G

8、SH、SOD和GSH-Px的降低，其中高劑量組的作用效果極為顯著，較之模型組分別提高了52.45%、19.65%和20.63%。
　　三、桑椹多糖化學(xué)表征
　　為了進(jìn)一步闡明桑椹抗酒精性肝損傷的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采用精密的分析方法對桑椹多糖的物質(zhì)組分、組成比例進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)FMPS中含總糖67.96%，糖醛酸18.51%，蛋白質(zhì)1.63%，硫酸基6.21%；桑椹多糖是一種雜多糖，其單糖組成及比例為：甘露糖50.54%，葡萄

9、糖21.53%，半乳糖18.13%，半乳糖醛酸1.51%，葡萄糖醛酸2.41%，木糖2.22%，鼠李糖2.01%，阿拉伯糖1.50%，L-巖藻糖0.61%。
　　四、桑椹多糖提取工藝研究
　　本實驗采用酶輔助超聲波提取，先進(jìn)行單因素篩選，再結(jié)合響應(yīng)曲面法，以桑椹多糖提取率、抗氧化活性和ADH激活率為綜合評價指標(biāo)，對桑椹多糖的提取工藝進(jìn)行系統(tǒng)研究。根據(jù)中心組合設(shè)計原理，建立了多糖提取率與酶處理溫度（℃）、酶的用量（%）、溶劑（