多重藥效結(jié)合數(shù)理模式的漏蘆抗肺癌物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、漏蘆為菊科漏蘆屬植物祁州漏蘆Rhaponticum uniflorum(L.)DC.的干燥根，具有清熱、解毒、消癰、除腫等功效。漏蘆有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、直接殺傷腫瘤細(xì)胞、阻滯腫瘤細(xì)胞周期、逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性、提高機(jī)體免疫力等方面的抗腫瘤作用。漏蘆臨床抗腫瘤療效確切，但是抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)尚未明確，本研究以多重藥效結(jié)合數(shù)理模式的方法為漏蘆抗肺癌物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供思路。
　　本研究以生物活性為導(dǎo)向，采用液液萃取、大孔吸附樹脂

2、、高效液相色譜等方法分離純化漏蘆抗肺癌的活性部位;建立人肺腺癌細(xì)胞A549、H1299模型和鼠源性肺癌細(xì)胞Lewis接種C57 BL/6J小鼠模型，篩選漏蘆抗肺癌的活性部位。結(jié)果表明，漏蘆萃取部位均有抑制A549、H1299增殖的作用，正丁醇部位優(yōu)于其他部位，抑制增殖的IC50分別為生藥濃度205.43±16.10μg·mL-1和315.87±13.72μg·mL-1;漏蘆大孔吸附樹脂乙醇洗脫部位均有抑制A549、H1299增殖的作用，

3、50％部位優(yōu)于其他部位，抑制增殖的IC50分別為生藥濃度163.09±13.22μg·mL-1和287.34±15.04μg·mL-1。漏蘆正丁醇部位能顯著抑制Lewis荷瘤小鼠腫瘤的生長，正丁醇高低劑量組抑瘤率分別為37.43±4.80％和32.91±7.31％。
　　本研究采用UPLC/Q-TOF-MS-MS和HPLC對漏蘆活性部位進(jìn)行分析，漏蘆活性部位的主要成分是三萜類、甾醇類和酚酸類。針對不同批次、產(chǎn)地的漏蘆，運(yùn)用主成分分

4、析、聚類分析，初步發(fā)現(xiàn)漏蘆抗肺癌的活性組分是以齊墩果酸和熊果酸為代表的三萜類，以β-谷甾醇和豆甾醇為代表的甾醇類，以迷迭香酸和咖啡酸為代表的酚酸類。在此基礎(chǔ)上，利用基線等比結(jié)合均勻設(shè)計的數(shù)理統(tǒng)計方法對漏蘆三萜類、甾醇類、酚酸類組分結(jié)構(gòu)配比進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計，得出12個組別。
　　本研究建立肺癌細(xì)胞A549體外模型，觀察漏蘆中組分結(jié)構(gòu)配比對A549的增殖、凋亡、侵襲、遷移的影響，通過計算回歸方程，得出優(yōu)化組分結(jié)構(gòu)配比，并獲得組分貢獻(xiàn)度系數(shù)

5、;建立人源性肺癌細(xì)胞A549接種裸鼠的體內(nèi)模型，驗(yàn)證優(yōu)化配比的整體抗肺癌作用。結(jié)果表明，漏蘆組分結(jié)構(gòu)配比12為優(yōu)化配比。配比12顯著抑制A549增殖，抑制增殖的IC50為143.00±28.31生藥μg·mL-1;配比12顯著誘導(dǎo)A549凋亡，凋亡率為42.04％;配比12顯著抑制肺癌細(xì)胞A549侵襲，侵襲的細(xì)胞數(shù)為87.88±8.36個;配比12顯著抑制A549遷移，A549的傷口愈合率為9.56％;優(yōu)化配比12抑制裸鼠腫瘤生長的抑制