NF-kB信號(hào)通路在七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血保護(hù)機(jī)制中的作用.pdf

1、第一部分七氟烷預(yù)處理急性期心肌保護(hù)機(jī)制
　　 目的:
　　 觀察七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的急性期保護(hù)作用(APC)；探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其介導(dǎo)的凋亡和抗凋亡參與保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 方法:
　　 成年雄性SD大鼠143只，建立急性大鼠在體心肌I/R損傷模型(缺血30 min再灌注2 h)。隨機(jī)分為空白對(duì)照組(CON組)、單純?nèi)毖M(I/R組)、七氟烷預(yù)處

2、理急性保護(hù)組(APC組，缺血前吸入2.5％七氟烷30 min，排除15 min)、七氟烷對(duì)照組(SEVO組，吸入七氟烷但不缺血)、抑制劑組[NF-κB的特異性抑制劑小白菊內(nèi)酯(PTN)，PTN組]、抑制劑溶媒對(duì)照組(DMSO組)、PTN+APC組、APC+PTN組。
　　 采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法測(cè)定心肌梗死范圍，TUNEL法檢測(cè)凋亡心肌細(xì)胞并計(jì)算凋亡指數(shù)。于缺血前即刻和再灌注2 h時(shí)分別隨機(jī)取5只大鼠處死取左心室，采

3、用Western blot法測(cè)定NF-κB相關(guān)蛋白(p65、p50)、炎性因子(ICAM-1、TNF-α)以及凋亡和抗凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3、Bcl-2)的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 梗死范圍與凋亡指數(shù)：與I/R組相比，APC組心肌梗死范圍縮小，細(xì)胞凋亡指數(shù)降低，且該作用可被NF-κB抑制劑PTN所阻斷(P<0.05)。
　　 Western blot結(jié)果：①缺血前即刻，與CON組相比，APC組與S

4、EVO組NF-κB(p65、p50)以及Bcl-2的蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。②再灌注2 h時(shí)，與CON組相比，I/R組和APC組NF-κB(p65、p50)、ICAM-1、TNF-α蛋白表達(dá)上調(diào)，I/R組Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)；與I/R組相比，APC組NF-κB(p65、p50)、ICAM-1、TNF-α、Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)的幅度降低，Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05

5、)。
　　 結(jié)論:
　　 七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠在體心肌I/R損傷具有急性期保護(hù)作用。NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路不僅作為觸發(fā)因子而且作為調(diào)控因子參與了七氟烷預(yù)處理的急性期心肌保護(hù)機(jī)制，通過七氟烷預(yù)處理在缺血前上調(diào)NF-κB(p65、p50)和Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)再灌注后其下游ICAM-1、TNF-α的表達(dá)，降低由I/R損傷引起Caspase-3蛋白表達(dá)的上調(diào)，減輕心肌細(xì)胞凋亡，縮小心肌梗死范圍，發(fā)揮急性期的心肌保護(hù)作用。

6、>　　 第二部分七氟烷預(yù)處理延遲期心肌保護(hù)機(jī)制
　　 目的:
　　 觀察七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的延遲期保護(hù)作用(SWOP)；探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其介導(dǎo)的自噬和凋亡參與保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 方法:
　　 成年雄性SD大鼠140只，建立延遲性大鼠在體心肌I/R損傷模型(缺血30 min再灌注2 h)。隨機(jī)分為單純?nèi)毖M(I/R組，缺血前1 d吸入33％氧

7、氣2 h)、七氟烷預(yù)處理延遲保護(hù)組(SWOP組，缺血前1 d吸入2.5％七氟烷2 h)、空白對(duì)照組(CON組)、七氟烷對(duì)照組(SEVO組)、抑制劑組[NF-κB的特異性抑制劑小白菊內(nèi)酯(PTN)，PTN組]、PTN+SWOP組、抑制劑溶媒對(duì)照組(DMSO組)。
　　 采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法測(cè)定心肌梗死范圍；光鏡觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化，透射電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)自噬體的變化；采用單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)(SPECT

8、)觀察再灌注后大鼠在體凋亡心肌細(xì)胞放射性核素顯像的變化。于缺血前即刻和再灌注2 h時(shí)分別隨機(jī)取5只大鼠處死取左心室，采用Western blot法測(cè)定NF-κB相關(guān)蛋白(p65、p50、p-IκBα)、炎性因子(TNF-α、IL-1β)、自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ、Cathepsin B)和凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3)的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 梗死范圍與凋亡指數(shù)：與I/R組相比，SWOP組心肌梗死范圍縮小，心

9、肌組織形態(tài)損傷減輕，該作用可被NF-κB抑制劑PTN所阻斷(P<0.05)；透射電鏡結(jié)果顯示缺血前，SWOP組心肌細(xì)胞有自噬適度激活；SPECT結(jié)果顯示SWOP組心肌異常高放射性區(qū)/本底(T/B)比值較I/R組降低(P<0.05)。
　　 Western blot結(jié)果：①缺血前即刻：與CON組相比，SWOP組與SEVO組NF-κB(p65、p50、p-IκBα)、炎性因子(TNF-α、IL-1β)、自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ和Ca

10、thepsinB)的蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。②再灌注2 h時(shí)：與CON組相比，I/R組和SWOP組NF-κB蛋白(p65、p50、p-IκBα)、炎性因子(TNF-α、IL-1β)、自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ、Cathepsin B)以及凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3)的蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。與I/R組相比，SWOP組除Cathepsin B外，其余各因子表達(dá)上調(diào)的幅度均降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論:

11、　　 七氟烷預(yù)處理對(duì)大鼠在體心肌I/R損傷具有延遲期保護(hù)作用。NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能作為觸發(fā)因子通過其負(fù)反饋機(jī)制參與了七氟烷預(yù)處理的延遲期心肌保護(hù)機(jī)制。七氟烷預(yù)處理在缺血前上調(diào)NF-κB(p65、p50、p-IκBα的表達(dá)，隨后上調(diào)其下游炎性因子(TNF-α、IL-1β)，適度激活自噬，形成負(fù)反饋抑制，降低再灌注后NF-κB(p65、p50、p-IκBα)、TNF-α、IL-1β、LC3-Ⅱ、Caspase-3的蛋白表達(dá)上調(diào)的幅度