Adrenomedullin-Intermedin對(duì)大鼠腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察腎上腺髓質(zhì)素（AM）對(duì)大鼠腎臟缺血再灌注損傷（IRI）誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響，并探討其機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、Wistar大鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組、IRI組、轉(zhuǎn)空質(zhì)粒組和轉(zhuǎn)AM 質(zhì)粒組。大鼠右腎切除后1周，用超聲微泡造影劑介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將大鼠AM 真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠腎臟，1周后采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染成功后夾閉左腎動(dòng)脈45min制作腎臟IRI 模型，于再灌注24h后留取腎組織

2、標(biāo)本。
　　 2、TUNEL 染色檢測(cè)腎組織細(xì)胞凋亡。
　　 3、RT-PCR 檢測(cè)腎組織Bcl-2、Bax和Fas的Mrna表達(dá)。
　　 4、Western免疫印跡法檢測(cè)caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白質(zhì)表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、轉(zhuǎn)染效率：轉(zhuǎn)AM 質(zhì)粒組的AM表達(dá)顯著高于轉(zhuǎn)空質(zhì)粒組。
　　 2、與假手術(shù)組相比，IRI組腎組織凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加（p＜0

3、.05）；腎組織Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表達(dá)上調(diào)（p＜0.05），但Bax上調(diào)顯著，故Bax/Bcl-2升高（p＜0.05）。
　　 3、與IRI組相比，轉(zhuǎn)AM 質(zhì)粒組腎組織凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少（p＜0.05）；Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表達(dá)下調(diào)（p＜0.05），Bcl-2表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)（p＜0.05），故Bax/Bcl-

4、2降低（p＜0.05）。
　　 4、轉(zhuǎn)空質(zhì)粒組和IRI組比較，上述各指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。
　　 結(jié)論：AM能夠減輕腎臟IRI 誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡，其機(jī)制至少部分是通過抑制caspase 依賴的內(nèi)、外源性凋亡途徑實(shí)現(xiàn)的。
　　 第二部分:目的：以大鼠單腎缺血再灌注損傷（IRI）模型模擬體內(nèi)腎臟IRI，通過轉(zhuǎn)染高表達(dá)intermedin（IMD）質(zhì)粒，觀察IMD對(duì)腎臟IRI后血管生長(zhǎng)相關(guān)因子HI

5、F-1a、VEGF和Tie-2表達(dá)的影響，探討IMD對(duì)腎臟IRI的修復(fù)作用。
　　 方法：
　　 1、模型制作：Wistar大鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組、IRI組、轉(zhuǎn)空質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)IMD質(zhì)粒組。假手術(shù)組：切除大鼠右腎1周后，鈍性分離左腎動(dòng)靜脈，不夾閉；IRI組：切除大鼠右腎1周后，夾閉左腎腎動(dòng)脈45min；轉(zhuǎn)IMD 質(zhì)粒組和轉(zhuǎn)空質(zhì)粒組：大鼠右腎切除后1周，用超聲微泡造影劑介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將大鼠IMD 真核表達(dá)質(zhì)粒∕空質(zhì)粒轉(zhuǎn)

6、染大鼠腎臟，轉(zhuǎn)染成功后夾閉左腎動(dòng)脈45min 制作腎臟IRI 模型。分別于再灌注1d、2 d、3d、4 d、7 d和14 d后留取腎組織標(biāo)本。
　　 2、采用 RT-PCR 檢測(cè)HIF-1a、VEGF和Tie-2的mRNA表達(dá)。
　　 3、Western免疫印跡法檢測(cè)腎組織VEGF的蛋白質(zhì)表達(dá)。
　　 4、ELISA 檢測(cè)HIF-1a和Tie-2的蛋白質(zhì)表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、與假手術(shù)組相

7、比，HIF-1a mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)均于再灌注后1d表達(dá)達(dá)到高峰，2d 持續(xù)高表達(dá)，3d表達(dá)開始明顯下降,4d、7d和14d 接近于假手術(shù)組；VEGF和Tie-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)均于再灌注后1d 開始增加，2d 達(dá)到高峰，3d 開始下降，4d、7d和14d 接近于假手術(shù)組（p＞0.05）；
　　 2、轉(zhuǎn)IMD 質(zhì)粒組大鼠腎組織HIF-1a、VEGF和Tie-2 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)于再灌注后1d、2d、3d和4d 顯