EPO后處理抗大鼠腎臟缺血再灌注損傷作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠缺血再灌注（ischemia-reperfusion， IR）、促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）后處理和缺血后處理（ischemia postconditioning，IPO）模型，觀察：1、EPO后處理在大鼠腎臟IRI中的保護(hù)作用；2、EPO后處理對大鼠腎組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）和熱休克蛋白-70（heat shock prote

2、in-70, HSP-70）表達(dá)的影響；3、EPO后處理與IPO在大鼠腎臟IRI中作用的差別。
　　方法：健康雄性SD（Sprague-dawly）大鼠共48只，隨機(jī)分成4組，每組12只，分別為：（1）假手術(shù)組（S組）：麻醉后以腹正中線為切口，逐層開腹，將部分腸管移出體外，游離兩側(cè)腎臟，分離并結(jié)扎右側(cè)腎蒂，分離左側(cè)腎蒂，暴露傷口45min后縫合；（2）缺血再灌注組(IR組)：開腹后，結(jié)扎右側(cè)腎蒂，分離左側(cè)腎蒂并用動脈夾鉗夾，45m

3、in后恢復(fù)血供；（3）EPO后處理組（EPO組）：前期處理同IR組，再灌前5min給予靜脈注射EPO3000u/kg，5min后恢復(fù)血供；
　?。?）缺血后處理組（IPO組）：前期處理同IR組，缺血后5min用動脈夾給予反復(fù)10s供血-10s缺血處理，共6次，3min后恢復(fù)血供。造模成功后，以上各組分別隨機(jī)選取6只大鼠，于再灌后3h采取血清標(biāo)本，于6h處死同時留取血清和腎組織標(biāo)本；各組其余6只大鼠于再灌后12h采取血清標(biāo)本，于24

4、h處死同時留取血清和腎組織標(biāo)本。測定各組大鼠血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血清肌酐（serum creatinine values，SCr）、血清超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,S OD）、血清丙二醛（Malondialdehyde，MDA）；將各組腎臟標(biāo)本進(jìn)行HE染色，觀察其病理學(xué)改變；采用免疫組織化學(xué)法觀察各組大鼠腎組織HIF-1?、HSP-70的表達(dá)情況并進(jìn)行圖像軟件分析。<

5、br>　　結(jié)果：1、各組大鼠BUN和SCr結(jié)果：與S組比較，缺血再灌注各組BUN和SCr水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05）。缺血再灌注各組組內(nèi)BUN和SCr水平隨時間延長而逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與IR組相比較， IPO組與 EPO組 BUN和SCr總體水平均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與 EPO組相比較， IPO組總體 BUN和SCr水平無明顯差異（P>0.05）。2、各組大鼠SOD和MD

6、A結(jié)果：與S組比較，缺血再灌注各組大鼠SOD水平均明顯降低，MDA水平均明顯升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與IR組比較，IPO組與EPO組SOD總體水平升高，MDA總體水平降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與EPO組相比較，IPO組總體SOD和MDA水平無明顯差異（P>0.05）。3、各組大鼠腎組織HE染色結(jié)果：S組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)均未見明顯異常。與S組相比較，IR組可見腎小管上皮細(xì)胞水腫、部分壞死，明顯管型形成，間質(zhì)充血

7、、水腫、大量炎細(xì)胞浸潤。與IR組相比較，IPO組腎小管上皮輕度水腫，有少量細(xì)胞壞死，管型及炎癥細(xì)胞少見，間質(zhì)輕度充血，病理改變減輕。與IPO組相比較，EPO組腎組織病理變化無明顯差異。各組組內(nèi)比較，24h腎組織病理損傷重于6h。4、各組大鼠腎組織HIF-1?表達(dá)結(jié)果:S組幾乎未見HIF-1?表達(dá)。以S組為對照，缺血再灌注各組腎小管上皮細(xì)胞中均可見HIF-1?表達(dá)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。IR組在6h可見HIF-1?表達(dá)，24h

8、 HIF-1?表達(dá)高于6h，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與IR組相比較，EPO組在6h、24h HIF-1?表達(dá)均增加，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與EPO組相比較，IPO組在6h、24h HIF-1?表達(dá)無明顯差別（P>0.05）。5、各組大鼠腎組織HSP-70表達(dá)結(jié)果:S組幾乎未見HSP-70表達(dá)。以S組為對照，缺血再灌注各組腎小管上皮細(xì)胞中均可見HSP-70表達(dá)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。EPO組6h可見HSP

9、-70表達(dá)呈強(qiáng)陽性，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），24h表達(dá)與6h相比無明顯差別。與EPO相比較，IR組HSP-70表達(dá)在6h呈弱陽性，在24h呈陽性，總體表達(dá)弱于EPO組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與EPO組相比較，IPO組HSP-70在6h和24h的表達(dá)均無明顯差別（P>0.05）。
　　結(jié)論：1、EPO后處理對大鼠腎臟IRI可產(chǎn)生保護(hù)作用。2、EPO可能通過誘導(dǎo)HIF-1?和HSP-70表達(dá)增加對腎臟IRI產(chǎn)生保