結(jié)核分枝桿菌特異的RD2-RD11蛋白應(yīng)用于結(jié)核免疫診斷的研究.pdf

1、結(jié)核病是一個(gè)全球性的重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。及時(shí)準(zhǔn)確地診斷結(jié)核病是控制結(jié)核的重要組成部分。在發(fā)展中國(guó)家,目前唯一使用的免疫學(xué)診斷方法——結(jié)核菌素皮試(tuberculin skin test,TST)由于包含許多與其他分支桿菌交叉的抗原,其特異性不夠理想。因此研發(fā)一種能夠準(zhǔn)確、快捷、特異并且價(jià)格合理地診斷活動(dòng)性結(jié)核和結(jié)核潛伏感染的方法迫在眉睫。
　　 結(jié)核分枝桿菌與卡介苗差異區(qū)域(RD區(qū))抗原是篩選特異性抗原應(yīng)用于結(jié)核免疫診斷和疫苗

2、研制的熱點(diǎn)區(qū)域。本項(xiàng)研究成功地克隆、原核表達(dá)、純化了RD2和RD11的七個(gè)蛋白,包括Rv1978,NrdF1,MPT64,CFP21,Rv1985c,PPE57和PPE59,并更進(jìn)一步研究評(píng)估了這些蛋白在結(jié)核診斷中的價(jià)值。評(píng)估七個(gè)蛋白的T細(xì)胞免疫的研究是通過(guò)在活動(dòng)性結(jié)核病人(n=58)、結(jié)核潛伏感染者(n=21)和BCG接種的健康對(duì)照人群(n=32)中使用IFN-γELISPOT方法進(jìn)行的。而Rv1978,NrdF1,CFP21和Rv1

3、985c四個(gè)蛋白的體液免疫研究是通過(guò)在活動(dòng)性結(jié)核病人(n=117)、結(jié)核潛伏感染者(n=45)和BCG接種的健康對(duì)照(n=67)中使用ELISA方法進(jìn)行的,體液免疫研究的人群包括了所有納入細(xì)胞免疫的人群。兩項(xiàng)研究均同時(shí)使用了方法對(duì)照,T細(xì)胞免疫研究采用商品化的T-SPOT.TB試劑盒作為對(duì)照,而體液免疫研究采用商品化的PATHOZYME-MYCOIgG試劑盒作為對(duì)照。
　　 研究顯示七個(gè)重組蛋白能夠誘導(dǎo)TB組和LTBI組的PBM

4、C產(chǎn)生特異的IFN-γ分泌,而對(duì)照組中幾乎沒(méi)有。使用抗原Rv1985c,Rv1978,NrdF1,MPT64,CFP21,PPE57和PPE59的ELISPOT方法檢測(cè)活動(dòng)性結(jié)核的敏感性分別為63％,59％,60％,82％,48％,59％和47％,而其在BCG接種的健康對(duì)照中的特異性分別為97％94％,90％,76％,93％,100％和93％。研究同時(shí)意外地發(fā)現(xiàn),LTBI組的對(duì)于Rv1978的T細(xì)胞反應(yīng)顯著地高于TB組,提示Rv1978

5、可能與結(jié)核桿菌的潛伏感染相關(guān)。
　　 雖然抗原PPE57、NrdF1或Rv1985c在檢測(cè)活動(dòng)性結(jié)核的敏感性低于抗原ESAT-6,僅與CFP-10相當(dāng),然而研究發(fā)現(xiàn)它們與RD1抗原的聯(lián)合使用能夠提高或者有提高敏感性的趨勢(shì)。PPE57或NrdF1或Rv1985c與CFP-10聯(lián)合使用可以將檢測(cè)的敏感性分別從67.9％顯著提高到78.6％或83.9％或83.9％,而與ESAT-6聯(lián)合使用可將敏感性從82.1％分別提高到85.7％、9

6、2.9％和92.9％。
　　 在血清診斷研究中,結(jié)果顯示只有Rv1985c能夠同時(shí)被TB和LXBI組人群所特異識(shí)別,Rv1978僅觀察到TB組抗體反應(yīng)高于BCG接種健康對(duì)照組,而抗原NrdfF1和CFP21在三組人群中無(wú)顯著差別。RV1985cIgG-ELISA在診斷活動(dòng)性結(jié)核和結(jié)核潛伏感染的敏感性分別達(dá)到了52％和62％,在BCG健康人群中的特異性為97％。比較結(jié)果顯示Rv1985c在診斷活動(dòng)性結(jié)核的敏感性要顯著優(yōu)于PATHO